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- 浙江省
- 分子克隆是在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 技术资料
- 服务名称：
真核表达载体构建
- 提供商：
XSL
- 服务介绍
- 实验原理
T4噬菌体DNA连接酶催化DNA连接反应分为3步：首先，T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶—AMP复合 物；然后，酶—AMP复合物再结合到具有5’磷酸基和3’羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最后产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。
DNA重组的方法主要有粘端连接法和平端连接法，为了防止载体本身的自连，可以通过(牛小肠碱性磷酸 酶)CIP处理克服。
连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性.但是在这个温度下，粘性末端的氢键结合是不稳定的。因 此人们找到了一个折中温度，即12-16℃，连接12-16h(过夜)，这样既可最大限度地发挥连接酶的活性，又 兼顾到短暂配对结构的稳定。
- 实验流程
连接反应；
电泳检测连接产物。
- 客户提供 样本DNA，基因序列，试剂盒。
- 公司提供 构建好的载体，电泳胶图，测序结果。
欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
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