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- 实时荧光定量PCR技术，是指在PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
实时荧光定量PCR实验服务
- 提供商：
XSL
服务内容
细胞/组织的基因差异表达检测，经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等)，特定基 因在不同时段的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证。
组织/细胞样品中基因拷贝数的确定，DNA或RNA的相对和绝对定量分析。
包括病原微生物或病毒含量的检测，转基因动植 物转基因拷贝数的检测，RNAi基因失活率的检测等。
基因分型，基因突变及多态性方面的研究。
技术原理
Real-time PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线 对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和 标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。
实时荧光定量PCR技术具有特异性强，有效解决了PCR污染问题、自动化程度高等特点，做到PCR每循环一次就收集一个 数据，建立实时扩增曲线，准确地确定Ct值，从而根据Ct值确定起始DNA拷贝数，做到了真正意义上的DNA定量。
技术流程
- RNA的提取
- DNase I 消化样品RNA 中的DNA
- RNA琼脂糖凝胶电泳
- RNA反转录为cDNA Real-Time PCR引物设计的要求
- Tm=55~65 ℃
- GC=30~80%
- PCR扩增产物长度：引物的产物大小不要太大，一般在80~300 bp之间都可。 ④ 引物的退火温度要高，一般要在60 ℃以上。
- cDNA与引物质量检测
- 利用相对定量的方法分析目的基因表达量的情况：
- 定量PCR检测
- 扩增曲线和溶解曲线
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文献和实验实时荧光定量PCR从1996年美国AppliedBiosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法
miRNA实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR从1996年美国Applied Biosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个
实时定量PCR也被称为实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)，是一种在DNA扩增反应中加入荧光基团，以荧光信号积累实时监测每次PCR循环后产物总量，进而对待测样品中的目的序列进行定量分析的方法。 基本原理 在学习实时定量PCR数据处理之前，我们首先需要了解一下它的数学原理，Ct值为什么是我们数据处理过程中的一个关键的因素。这两个图显示的是实时定量PCR的一组结果。上图是原始的线性图谱，下图则是处理过的指数图谱，但是它们两者表示的是同样
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