测定操作: 1. 分光光度计预热30 min,调节波长到630 nm,蒸馏水调零。 2. 试剂三置于37℃水浴中预热30min。 3. 试剂五置于冰浴预冷30min。 4. 标准管:取1.5 mL EP管,加入500μL 标准液,500μL试剂六,500μL试剂七,混匀后室温静置30min,于630 nm测定光吸收,记为A标准管。 5. 对照管:取1支1.5 mL EP管,加入250μL粗酶液,500μL试剂三,250μL蒸馏水,混匀后37℃水浴中保温30min;再加入500μL试剂五,混匀后冰浴5min,11000rpm,4℃,离心10min;取500μL上清液,
加入1支新的1.5 mL EP管;再加入500μL试剂六,500μL试剂七,混匀后室温静置30min,于630 nm测定光吸收,记为A对照管。 6. 测定管:取1支1.5 mL EP管,加入250μL粗酶液,500μL试剂三,250μL试剂四,混匀后37℃水浴中保温30min;再加入500μL试剂五,混匀后冰浴5min,11000rpm,4℃,离心10min;取500μL上清液,加入1支新的1.5 mL EP管;再加入500μL试剂六,500μL试剂七,混匀后室温静置30min,于630 nm测定光吸收,记为A测定管。