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嘉兴硕玺生物有限公司
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siRNA敲减
包括siRNA导入优化和质粒转染优化。由于siRNA和RNA干扰载体都需要转入细胞才能发挥作用。因此如何高效地将RNA干 扰产品转入细胞是成功进行RNA干扰实验的关键步骤。本实验有专业的siRNA和质粒转染技术,可以对转染效率进行优 化,提升RNA干扰效果。
服务内容:
1)293细胞干扰效率验证服务——构建好的RNA干扰质粒转染293细胞,通过荧光定量RT-PCR或者Western-blot验证干扰 效率。
2)客户细胞株转染优化和干扰效率验证服务——转染效率是RNA干扰成功的关键步骤。星森林实验采用Genefection系列转 染试剂,通过对转染效率优化提升RNA干扰效率。在客户细胞中验证RNA干扰效率。
3)siRNA干扰效率验证服务——采用siRNA转染试剂进行预转染实验,优化转染效率,通过荧光定量RT-PCR或者 Western-blot验证干扰效率。
服务流程:
1)培养细胞
2)优化转染条件:在荧光显微镜下观察转染效率或者用流式细胞检测评估转染效率。
3)根据靶基因序列设计一组RNA干扰序列。
4)采用荧光定量PCR或Western blot评估RNA干扰效率。
5)(可选)用相应抗生素筛选稳定表达shRNA或miRNA的细胞株。 
收费标准/服务周期/提供结果:
欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
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文献和实验缺失 根据其亚细胞定位选择合适的敲减方法。有时发现细胞的感染效率很高,但是lncRNA的干扰效率却很低。因为RNA干扰作用只作用在胞浆内,细胞核中的lncRNA无法起作用,这时一般的siRNA或者shRNA方法可能不适用。 3. 其他敲减方法:CRISPR/Cas9、反义寡核苷酸、位点反转和启动子缺失等方法。 • 非编码能力验证 构建含有肽段和lncRNA的质粒,验证其是否有编码能力。 • LncRNA互作验证 1.RIP (蛋白已知,RNA未知) RIP
一般情况下,瞬时转染是将 DNA 导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中,重组 DNA 导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的 DNA 不必整合到宿主染色体,可在比稳定转染较短时间内(最多一周左右)收获转染的细胞,并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。如果过表达基因用质粒,如果敲降用的是 siRNA(在 microRNA 实验中,过表达用的是 mimics,敲降用的是 inhibitor)。通过瞬时转染,将目的基因敲降或者过表达(gain and loss 实验),观察下游
一般情况下,瞬时转染是将 DNA 导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中,重组 DNA 导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的 DNA 不必整合到宿主染色体,可在比稳定转染较短时间内(最多一周左右)收获转染的细胞,并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。如果过表达基因用质粒,如果敲降用的是 siRNA(在 microRNA 实验中,过表达用的是 mimics,敲降用的是 inhibitor)。通过瞬时转染,将目的基因敲降或者过表达(gain and loss 实验),观察下游
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