细胞凋亡

细胞凋亡途径中各事件的发生是有时序性的，即各事件按先后顺序依次发生，最终导致凋亡小体的出现，细胞随着发生凋 亡。
其典型特征如下：
①早期凋亡：细胞膜结构发生改变，磷脂酰丝氨酸外翻；
②早中期凋亡：细胞质密度增加，线粒体膜电位消失细胞膜，通透性改变，释放细胞色素C到胞浆中；
③中晚期凋亡：细胞凋亡信号转导；
④晚期凋亡：DNA降解为180~200bp片段大小。

         在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，细胞发生凋亡时，细胞膜发生变化，PS 从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面。Annexin-V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋 白，能与PS高亲和力结合。

用荧光素（FITC、Alexa Fluor488等）标记的Annexin-V作为探针，利用流式细胞仪或荧光显微 镜即可鉴别凋亡细胞和活细胞。 
         坏死的细胞PS同样也会从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面，Annexin-V也能识别坏死细胞表面的PS,所以Annexin-V 无法区分坏死细胞和凋亡细胞。另外，碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料，能够与细胞内DNA结合，而且它不能 透过完整的细胞膜。早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整，PI染料无法自由通过细胞膜进入细胞内与DNA结合，所以PI 染料无法标记凋亡细胞和活细胞，而PI染料却能够通过坏死细胞的细胞膜与细胞内的DNA结合，坏死细胞内的PI染料被 488nm激光激发后会发射红荧光，被相应通道接收。所以Annexin V和PI同时使用，就可以区分活细胞、早期凋亡细胞和坏 死细胞。

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