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- xybio
- XY-sh0755
- 上海
- 2025年07月28日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
50管/48样
分光光度法50管/48样
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
UDPG焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG）。
测定原理：
UGP可逆催化反应生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。
试剂组成和配制：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存。
酶液提取：
- 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
- 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
- 液体：直接检测。
测定操作：
- 分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
- 取1mL石英比色皿，依次加入500μL试剂一，100μL试剂二，100μL试剂三，100μL试剂四，100μL试剂五，100μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处30s的吸光值A1和330s的吸光值A2，△A=A2-A1
计算公式：
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA÷（ε×d）×V反总×109]÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA÷（ε×d）×V反总×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
（3）按照细胞数量计算
酶活单位定义：每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /104 cell）= [ΔA÷（ε×d）×V反总×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T
=0.643×ΔA
（4）按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min/mL）＝[ΔA÷（ε×d）×V反总×109]÷V样÷T=321.54×ΔA
V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g ；500：细胞或细菌总数，500万。
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文献和实验； ②Qubit 准确度更高：蛋白质、游离核苷酸、EDTA 等物质在 260nm 处也存在吸收峰，从而影响紫外分光光度计定量的准确度，而荧光染料仅与目标核酸特异性结合，不受其他杂质影响，qubit 成为精准定量的 「金标准」； ③Qubit 检测范围更精准：紫外分光光度计检测范围较宽（通常 ng/μL-μg/μL），但低浓度（ ④紫外分光光度计操作更简单，成本更低：紫外分光光度计可以直接点样进行定量，无需专业试剂；而 Qubit 法需经加染料、孵育等步骤，再用仪器检测，依赖于专门的染料，仪器价格更贵
后续实验的进行。 小编以前做实验的时候一般是选用 Nanodrop 仪器进行检测，该仪器使用非常方便，不需要对样品进行稀释，并且具有非常宽的 RNA 测量范围。还有一些同学会使用传统紫外分光光度法或者梯度点样用琼脂糖凝胶电泳进行粗略检测，但这两种方法不仅准确度较低，而且紫外分光光度法对样本的消耗也较大，并不是很推荐哦。 2. 去除基因组 DNA 的污染很重要 RNA 中存在的基因组 DNA（gDNA）污染可能是最终 PCR 反应中假阳性结果出现的原因。一方面我们可以通过设计跨内含子的引物去除
、 实验流程 1、 总DNA提取 使用DNA提取试剂盒提取植物基因组DNA，通过紫外分光光度计检测或用标准品跑胶检测。一般来说，100ng的基因组DNA作为反应模板是足够的。 2、 EcoR1酶消化（20ul体系/样品） 3、Mse1酶消化（20ul体系/样品） 5、 预扩增（20ul体系/样品） sample 4ul Primer
