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- xybio
- XY-sh0708
- 上海
- 2025年07月26日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
50管/24样
分光光度法50管/24样
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。
测定原理：
植酸酶在一定温度和pH值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在700nm处有特征吸收峰，根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅，超声溶解器，回旋式振荡器。
试剂组成和配制：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
缓冲液：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存，临用前加缓冲液10mL配制，现用现配；用不完的试剂4℃保存一个月。
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存。
显色剂：粉剂×6瓶，4℃保存，临用前根据用量每瓶加1mL双蒸水溶解，再加4mL试剂二混匀。
样本处理：
- 酶制剂：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：500~1000的比例（建议称取约0.001g，加入1mL提取液）加入提取液，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，待测。
- 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。
- 饲料样品：饲料烘干粉碎，过40目筛，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。
- 培养液等液体样品，混匀直接测定。
测定操作表：
| 对照管 | 测定管 | |
| 样本（µL） | 100 | 100 |
| 37℃温育5min | ||
| 缓冲液（µL） | 400 | |
| 试剂一（µL） | 400 | |
| 混匀，37℃温育30min | ||
| 95℃，10min终止反应，冷却至室温 | ||
| 显色剂（µL） | 500 | 500 |
| 混匀，37℃静置15min，10000g，室温，离心5min，取上清，蒸馏水调零，测定700nm处吸光值，△A=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。 | ||
酶活性计算公式：
标准曲线：y = 0.2764x + 0.0082，R2 = 0.9998；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值。
- 按照蛋白浓度计算
植酸酶活性（μmol/min/mg prot）=（△A-0.0082）÷0.2764÷Cpr÷T =0.1206×（△A-0.0082）÷Cpr2．按照样本质量计算
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每克样本每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min /g 鲜重）=（△A-0.0082）÷0.2764÷W÷T =0.1206×（△A-0.0082）÷W
3. 培养液等液体样品
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每毫升液体每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min /mL）=（△A-0.0082）÷0.2764÷T =0.1206×（△A-0.0082）
Cpr：样本蛋白含量，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min。
注意事项：
1、显色剂需要临用前根据用量配制，每一瓶是10个样本的用量，新配制的显色剂若有颜色则已经污染或者试剂过期，应放弃使用。
2、ΔA线性范围为0.01-2。
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文献和实验一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色
(7)式或(9)式可计算叶绿素总量。 叶绿体色素的提取液中除含有叶绿素a与b外，还含有叶黄素和胡萝卜素，因为叶黄素和胡萝卜素的吸收光谱均在蓝光区，故不会干扰叶绿素含量在红光区的分光光度法测定。 器材与试剂 722分光光度计，叶绿体色素提取所需器材。 方法与步骤 1. 提取叶绿素。 2. 测定光密度。 在1cm比色杯中，注入叶绿素提取液(浓度大时需稀释)。另以叶绿素提取介质作为参比溶液注入同样的比色杯中。根据实验要求，选用相应的波长(测总量选用652nm，测叶绿素a、b含量
度。 （2） 吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 （3） 计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，影响精度的因素较多，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品，如维生素A测定法，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。
