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- xybio
- XY-sh0512
- 上海
- 2025年07月17日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
100管/48样
微量法100T/48S
注 意 ：正式测定之前选择2+3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业碱的原料细胞壁以及β+葡聚糖，降低酿造碱物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料碱的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业碱，BAX一般分离自最适生长pH为9 +11的微生物。
测定原理：
BAX在碱性环境碱催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与3,5+二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算BAX活力。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：
缓冲液：液体65mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。（若出现白色絮状或颗粒状沉淀，可60℃加热溶解后使用）。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
粗酶提取：
- 发酵液：发酵液于8000g，4℃，离心15min，取上清，作为待测样品。
- 酶干粉：称约0.1mg，加1mL缓冲液溶解待测。
- 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL缓冲液）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃，离心10min，取上清待测。
测定操作表：
- 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至540nm。
- 操作表
| 对照管 | 测定管 | |
| 样品（μL） | 60 | 60 |
| 缓冲液（μL） | 90 | 90 |
| 试剂一（μL） | 60 | |
| 试剂二（μL） | 90 | |
| 混匀，盖紧瓶盖，50℃水浴，反应30min，立即沸水浴10min灭活。(注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系) | ||
| 试剂一（μL） | 60 | |
| 试剂二（μL） | 90 | |
| 混匀，沸水浴显色5min，取200µL于微量石英比色皿/96孔板中540nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管+A对照管。每个测定管设一个对照管。 | ||
BAX计算公式：
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1. 按液体体积活力计算：
酶活定义：50℃，pH9.0条件下，每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力（nmol/min/mL）= （ΔA+0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106
= 391× (ΔA+0.0293)
2. 按蛋白浓度计算：
酶活定义：50℃，pH9.0条件下，每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr
= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
3. 按鲜重计算：
酶活定义：50℃，pH9.0条件下，每克样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力（nmol/min/g鲜重）= （ΔA +0.0293）÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷W
= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V反总÷V样=300µL÷60µL=5；
106：转化因子，即1mg/mL=106ng/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 1.4216x - 0.0293，R2 = 0.9985
1. 按液体体积活力计算：
酶活定义：50℃，pH9.0条件下，每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力（nmol/min/mL）= （ΔA+0.0293）÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106
= 782× (ΔA+0.0293)
2. 按蛋白浓度计算：
酶活定义：50℃，pH9.0条件下，每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.0293）÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr
= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
3. 按鲜重计算：
酶活定义：50℃，pH9.0条件下，每克样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力（nmol/min/g鲜重）= （ΔA +0.0293）÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106÷W
= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V反总÷V样=300µL÷60µL=5；
106：转化因子，即1mg/mL=106ng/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
注意事项：
1. 吸光度变化应该控制在0.01～0.8之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变；也可以延长或者缩短反应时间。
2. 试剂盒2+8℃保存，保质期3个月，建议尽快使用。
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文献和实验/2)――峰高一半处的峰宽。Wh/2＝2.355σ Ø标准偏差(standard deviation，σ)――正态分布曲线x＝±1时（拐点）的峰宽之半。正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小，分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。 Ø峰面积(peak area，A)――峰与峰底所包围的面积。A＝×σ×h＝2.507 σ h＝1.064 Wh/2 h 2．定性参数（保留值） Ø死时间
width，W)—峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。W＝4σ 半峰宽（peak width at half-height，Wh/2)—峰高一半处的峰宽。Wh/2＝2.355σ 标准偏差（standard deviation，σ)—正态分布曲线x＝±1时（拐点）的峰宽之半。正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小，分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。 峰面积(peak area，A)—峰与峰底所包围
(carboxyl group) 有极性，能解离，一般显弱酸性。 氨基(amino group) 有极性，可结合质子生成铵阳离子。 酰胺基(amido group) 由羧基与氨基缩合而成，有极性，其中的氧和氮都可作为氢键供体。肽链中联接氨基酸的酰胺键称为肽键。 巯基(sulfhydryl group) 有极性，在中性条件下不解离。易氧化成二硫键-S-S。 胍基(guanidino group) 强碱性基团，可结合质子。胍基磷酸键是高能键。 双键(double bond)
