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- xybio
- XY-sh0350
- 上海
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
50管/48样
分光光度法50管/48样
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
果糖1,6-二磷酸是机体内的高能代谢物和代谢调控剂，是糖酵解途径的重要中间体，广泛存在于动植物和微生物体内，能影响细胞内钾离子的浓度，改善葡萄糖和其他能量底物的代谢，促进组织氧的释放，广泛应用于临床医药制剂。
测定原理：
醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸降解，产物与DNPH缩合成紫红色物质，在540nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿。
试剂组成和配制：
试剂一：液体65mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体1mL×1支，4℃避光保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存。
样品处理：
- 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清待测。
- 细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清待测。
- 液体：直接检测。
测定操作：
| 对照管 | 测定管 | |
| 样品（μL） | 100 | |
| 蒸馏水（μL） | 100 | |
| 试剂一（μL） | 220 | 200 |
| 试剂二（μL） | 20 | |
| 充分混匀，37℃反应30min | ||
| 试剂三（μL） | 200 | 200 |
| 充分混匀，37℃温育10min | ||
| 试剂四（μL） | 800 | 800 |
| 充分混匀，于37℃温育10min，于1mL玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定540nm处吸光值，记为A对照管和A测定管，△A=A测定管- A对照管，对照管只要做一管。 | ||
计算公式：
标准曲线：y= 0.6971x+0.0012，R2=0.9983
1．按照质量计算
FDP（mg/g 鲜重）= (△A-0.0012) ÷0.6971÷（W÷V样总）
= 1.43×(△A-0.0012)÷W
2．按照细胞数量计算
FDP（mg/104 cell）= (△A-0.0012) ÷0.6971÷（细胞数量÷V样总）
= 1.43×(△A-0.0012)÷细胞数量
3．按照液体体积计算
FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.6971
= 1.43×(△A-0.0012)
W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL
注意事项：
最低检出限为1.72 mg/L
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文献和实验－曼氏酶不同，其动力学不符合米曼氏方程式：酶促反应速度和作用物浓度的关系曲线不呈矩形而常常呈S形，S形曲线与氧合血红蛋白的解离曲线相似(图9－1)。 当变构剂与调节亚基(或部位)结合后，变物剂对酶分子的构象发生什么样的影响呢?下面以果-1，6-二磷酸酶为例阐述这一过程。果糖-1，6-二磷酸酶是由四个结构相同的亚基所组成，每个亚基的分子量约为310，000Da。每个亚基上既有催化部位也有调节部位。在催化部位上能结合一分子FDP，在调节部位上能结合一分子变构剂。此酶有两种
亚基(或部位)结合后，变物剂对酶分子的构象发生什么样的影响呢?下面以果-1，6-二磷酸酶为例阐述这一过程。果糖-1，6-二磷酸酶是由四个结构相同的亚基所组成，每个亚基的分子量约为310，000Da。每个亚基上既有催化部位也有调节部位。在催化部位上能结合一分子FDP，在调节部位上能结合一分子变构剂。此酶有两种存在形式，即紧密型(T型、高活性)与松弛型(R型、低活性)。AMP是此酶的抑制变构剂。当酶处于T型时，因其调节部位转至聚合体内部而难以与AMP结合，故对AMP不敏感而表现出较高的活性。在第一个AMP分子
物，颜色在2-3小时稳定，可用比色法定量，该法非常灵敏，能测定每毫升0.5微克的Na NO2。 二、仪器和药品 721型分光光度计（或其他型号比色计），剪刀，真空泵（或注射器），小天平，温箱，烧杯，移液管，小烧杯（50ml） 0.2MKNO3：将20、22克KNO3溶于100ml蒸馏水中。 0.1M磷酸缓冲液（PH=7.5）：将85.2%ml 1/15M磷酸氢二钠与14.8ml 1/15M磷酸二氢钾混合均匀。 1/15MNa2HPO4溶液：1000ml中含Na
