- ￥2480
- xybio
- XY-sh0304
- 上海
- 2025年07月16日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
50管/48样
分光光度法50管/48样
注 意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
CA是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。
配合测定丙-酮酸含量、丙-酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量，其中（1）丙-酮酸含量和丙-酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙-酮酸含量、丙-酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况，（3）乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。
测定原理：
CA在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与肼反应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。
自备仪器和用品：
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂组成和配制：
酸性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
碱性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入15mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存。
标准品：液体1mL×1支，10μmol/mL柠檬酸标准液，4℃保存。
线粒体中柠檬酸提取：
称0.05~0.1g样品（建议称0.1g样本），加入0.5mL酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃离心5min；取上清至另一EP管中，11000g/min 4℃离心10min，弃上清（取300μL该上清液和300μL碱性提取液中和后可用于细胞质CA含量测定）；沉淀即线粒体，向沉淀中加入0.5mL酸性提取液，充分悬浮溶解，超声波破碎（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），取此溶液300μL和300μL碱性提取液中和，混匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
测定步骤：
1、分光光度计预热30 min以上，调节波长到330nm，蒸馏水调零。
2、试剂一、二和三37℃预热10min。
3、样本测定：
空白管和标准管通常只需要各做一个。
| 试剂名称(μL) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
| 试剂一 | 300 | 300 | 300 |
| 蒸馏水 | 300 | ||
| 标准液 | 300 | ||
| 样本 | 300 | ||
| 试剂二 | 100 | 100 | 100 |
| 试剂三 | 300 | 300 | 300 |
柠檬酸含量计算：
（1）按蛋白浓度计算
柠檬酸含量(μmol/mg prot)=[C标准管×(ΔA测定管－ΔA空白管)÷(ΔA标准管－ΔA空白管) ×V样]÷（V样÷Cpr）=10×(ΔA测定管－ΔA空白管)÷(ΔA标准管－ΔA空白管)÷Cpr
蛋白质含量需要另外测定。
（2）按样本鲜重计算
柠檬酸含量(μ mol/g鲜重)=[C标准管×(ΔA测定管－ΔA空白管)÷(ΔA标准管－ΔA空白管) ×V样]÷（W×V样÷V样总）=10×(ΔA测定管－ΔA空白管)÷(ΔA标准管－ΔA空白管)÷W
C标准管：标准液浓度，10μmol/mL； V样：加入反应体系中样本体积，0.3mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
注意：
最低检测限为10nmol/mg prot或1μmol/g鲜重。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验【 实验目的 】 学习紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法 【 实验原理 】 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光，RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。一般在260nm波长下，每1ml含1µg RNA溶液的光吸收值为0.022~0.024，每1m1含1µg DNA溶液的光吸收值约为0.020，故测定未知浓度RNA或DNA
； ②Qubit 准确度更高：蛋白质、游离核苷酸、EDTA 等物质在 260nm 处也存在吸收峰，从而影响紫外分光光度计定量的准确度，而荧光染料仅与目标核酸特异性结合，不受其他杂质影响，qubit 成为精准定量的 「金标准」； ③Qubit 检测范围更精准：紫外分光光度计检测范围较宽（通常 ng/μL-μg/μL），但低浓度（ ④紫外分光光度计操作更简单，成本更低：紫外分光光度计可以直接点样进行定量，无需专业试剂；而 Qubit 法需经加染料、孵育等步骤，再用仪器检测，依赖于专门的染料，仪器价格更贵
%，含1μg/mL DNA 钠盐的溶液光密度为0.020。RNA 溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 7 700-7 800，RNA 的含磷量为9.5%，含1μg /mL RNA 溶液的光密度为0.022-0.024。采用紫外分光光度法测定核酸含量时，通常规定：在260nm 波长下，浓度为1μg/mL 的DNA 溶液其光密度为0.020，而浓度为1μg/mL 的RNA 溶液其光密度为0.024。因此，测定未知浓度的DNA（RNA）溶液的光密度OD260nm，即可计算测出其中核酸的含量。该法简单
