蛋白双向电泳

实验技术简介：
         双向电泳（two-dimensional electrophoresis）是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合，即先进行等电聚焦电 泳（按照pI分离），然后再进行SDS-PAGE（按照分子大小），经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。

 
实验原理：
双向电泳是目前为止最有效、使用最多的蛋白分离方法。差异蛋白质组学是在双向电泳后用考麻斯亮蓝、 银离子或荧光染料等将蛋白斑点染色，然后比较差异。本公司在各类微生物、培养细胞、动植物组织（如 动物软硬组织、体液、植物种子、叶子等）、亚细胞组分的双向电泳分离及后续质谱鉴定中均有丰富的经 验。

蛋白质组学双向电泳技术服务项目：

1. 根据客户需求定制蛋白质组学实验方案
2. 各种规格胶条长度的双向电泳
3. 考麻斯亮蓝染色、银离子染色；
4. DIGE系统双向电泳。
5. 图像分析
6. 切胶质谱分析

服务说明：

1. 我们的实验只对我们制作的样本负责，如您提供的是直接做等点聚焦的样本，我们不敢保证蛋白的有效 分离。
2. 蛋白质组学实验的总体实验流程；

实验流程：

1. 样本制备
2. 固相预制胶条水化
3. 第一向等电聚焦（IEF）
4. 胶条平衡→第二向SDS-PAGE电泳
5. 凝胶染色检测
6. 图片扫描 双向电泳

1. 实验的试剂耗材、仪器设备、操作过程一份；
2. 实验结果凝胶扫描图片；
3. 电泳凝胶（可收费干胶）；
4. 剩余样本。

说明：

1. 样品制备指可用通常程序处理的原样，如样品较特殊（需要去除核酸、盐等杂质或需要浓缩），价格将 视进一步处理的难度和耗材用量另行商定；
2. 建议客户提供的原样（组织、细胞、菌体等）湿重不少于100mg,如直接提供蛋白提取物，则浓度不少 于4ug/ul，总量不少于5mg;
3. 样品的还原和烷基化过程一般在制备时进行；
4. 图象处理与切胶主要是手工操作成本。
5. 客户方需提供： 细胞，组织或蛋白。

实验周期： 5-10天 可提供技术支持：

1. 从现有的生物有机体基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等方法，获得带有目的基因的DNA片段。
2. 在体外，将带有目的基因的外源DNA片段连接到具有选择标记的载体分子上，形成能够自主复制的重 组DNA分子。
3. 将重组DNA分子转移到适宜的受体细胞，并使其一起增殖。
4. 从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了重组DNA分子的受体细胞克隆。
5. 由筛选出来的受体细胞克隆，提取出已经得到扩增的目的基因，供进一步分析研究使用。
6. 将分离到的目的基因克隆到表达载体上，导入受体细胞，使之在新的遗传背景下实现功能表达，产生 出人类所需要的物质。