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非蛋白质巯基(NPTs)试剂盒,微板法

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  • WS1210W
  • 国内
  • 2026年04月21日
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    • 英文名

      Non protein thiol (NPTs) kit

    • CAS号

      WS1210W

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    非蛋白巯基含量测定试剂盒说明书
    (货号:WS1210W 微板法 48 样)
    一、产品简介:
    巯基化合物在生物体内具有重要的解毒功能,可与烯烃类、氢氢酸、醛类、环氧化物、
    砷和很多重金属产生反应。因此,在动植物受到某些化学毒物干扰后,巯基含量有可能降
    低,其中非蛋白巯基成分下降得更快。
    本试剂盒采用 Ellman 方法,由 DTNB 与样品中的巯基进行反应,在 412nm 处有特征吸
    收峰,可通过该吸光值计算出非蛋白巯基的含量。
    二、试剂盒组分与配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 30mL×1
    4℃保存
    试剂一
    液体 13mL×1
    4℃保存
    试剂二
    液体 1mL×1
    4℃保存
    标准品
    粉剂 mg×1
    4℃保存
    若重新做标曲,则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品:
    酶标仪、96 孔板、低温离心机、可调式移液器、甲醇
    四、非蛋白巯基(NPT)的测定:
    1、样本制备
    ① 组织样本
    称取约 0.1g 组织,加入 0.4mL 提取液,进行冰浴匀浆。然后加入 0.8mL 甲醇,室温
    震荡 10min(防止液体蒸发丢失,可加甲醇补齐),12000rpm4℃离心 10min,取上清
    置冰上待测。
    【注】:根据实验室条件,可先液氮研磨,再加提取液,进行冰浴匀浆。
    根据研究需求,可按组织质量(
    g):提取液体积(mL)为 1:10 的比例进行提取。
    液体样本
    0.1ml 液体,加入 0.4mL 提取液,进行冰浴匀浆。然后加入 0.8mL 甲醇,室温震
    10min(防止液体蒸发丢失,可加甲醇补齐至 1.3mL),12000rpm4℃离心 10min
    取上清液置冰上待测。
    2、上机检测
    ① 酶标仪预热 30min,设置温度在 25℃,设定波长为 412nm。
    ② 所有试剂在使用前均须在室温或 25℃水浴锅中温育 10min。
    ③ 在 96 孔酶标板中依次加入:
    试剂名称(μL
    测定管
    对照管
    样品
    30
    30
    蒸馏水
    试剂一
    120
    140
    试剂二
    20
    混匀,25℃静置 2min,于 96 孔板,测定 412nm 吸光
    值,ΔA=A 测定-A 对照(每个样本做一个自身对照)。
    【注】:若加入试剂二有白色浑浊产生,立即混匀样本即可恢复澄清。本试剂盒仅供科研使用
    2
    五、结果计算:
    1、标准曲线方程:y=1.0702x + 0.0012x 为标准品摩尔质量(μmoL/mL)y 为ΔA
    2、按样本质量计算:
    非蛋白质巯基含量(μmoL/g 鲜重)=[(ΔA-0.0012)÷1.0702×V1]÷(W×V1÷V)
    =1.12×(ΔA-0.0012)÷W
    3、按液体体积计算:
    非蛋白质基含量(μmol/mL=[(ΔA-0.0012)÷1.0702×V1]÷(0.1×V1÷(V+0.1)
    =12.14×(ΔA-0.0012)
    V---上清液总体积,1.2mL
    V1---加入样本体积,0.03 mL
    W---样本质量,g
    附:标准曲线制作过程:
    1 制备标准品母液(1μmol/mL):标准品溶解在 2mL 蒸馏水中。
    2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:00.20.40.60.81.μmoL/mL。也可根
    据实际样本来调整标准品浓度。
    3 依据加样表的测定管操作,根据结果即可制作标准曲线。

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