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果胶甲酯酶(PE)试剂盒

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  • ¥540
  • wksubio
  • WS7070D
  • 国内
  • 2025年10月27日
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    • 英文名

      Pectin Methylesterase (PE) Kit

    • CAS号

      WS7070D

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    果胶酯酶(pectinesterasePE)试剂盒说明书
    (货号:WS7070D 48样)
    一、产品简介:
    果胶酯酶,属果胶酶系,亦称果胶甲酯酶、果胶氧化酶。催化水解果胶长链上的甲氧酯水解产生小分子
    物质果胶酸和甲醇, 从而增加果胶在水中的溶解度。广泛存在于高等植物和可以降解细胞壁的细菌和真菌
    中,起内源调控植物细胞壁上及细胞之间果胶含量的作用。
    果胶酯酶(PE)催化水解果胶分子释放H+,使反应体系的pH下降,用碱液维持体系的pH始终保持在7.8(
    酞指示剂维持在粉红色),通过碱消耗的NaOH 量反映果胶酯酶的活性。
    二、试剂盒组成和配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 80mL×1
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×1
    4℃保存
    临用前加 12.5mL 蒸馏水于试剂瓶(50加热溶
    解),冷却后转入 250mL 容量瓶,并定容至 250mL
    试剂二
    粉剂 mg×1
    4℃保存
    临用前甩几下使粉剂落入底部,再加 1.5mL 乙醇溶
    解备用。
    试剂三
    液体 15mL×1
    4℃保存
    试剂四
    液体 25mL×1
    4℃保存
    三、所需仪器和用品:
    天平、研钵、离心机、水浴锅或恒温培养箱。
    四、果胶酯酶(PE)的测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
    样本和试剂浪费!
    1、样本制备:
    ① 组织样本:取 0.5g 组织样品(叶片类样本可取 0.15g),加 1.5mL 提取液冰浴研磨,
    12000rpm4℃离心 15min,取全部上清液待测。
    【注】:若酶活力太高,可降低样本取样质量W或将上清液稀释2-5倍后再进行测定,并在计算公式
    中乘以稀释倍数D
    ② 细菌/培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或
    细胞加入 1.5mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声
    3s,间隔 10s,重复 30 次);12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 5001 的比例进行提取。
    2、上机检测:
    ① 试剂一于37℃烘箱保温10min
    ② 取出1mL的上清液转移至离心管或试管中。
    ③ 向离心管或试管中依次加25μL 试剂二,4mL试剂一,混匀,并用试剂三调pH7.8(粉
    红色)。
    ④ 将离心管或试管于37℃(水浴锅或恒温培养箱)孵育60min。每隔20分钟用试剂四调
    pH,使其维持在7.8(粉红色)。同时记录所消耗的试剂四的体积V2mL)。
    五、结果计算:
    1、按照样本质量计算:
    酶活定义:每克组织每小时消耗1μmol NaOH 定义为一个酶活单位U
    PE 活性(μmoL/min/g)=20×V2÷(V1÷V×W) ÷T×D =30×V2÷W×D
    2、按照蛋白浓度计算:本试剂盒仅供科研使用
    2
    酶活定义:每毫克蛋白每小时消耗1μmol NaOH 定义为一个酶活单位U
    PE 活性(μmoL/min/mg prot)=20×V2÷(V1÷V×Cpr)÷T×D =30×V2÷Cpr×D
    3、按细菌/细胞密度计算:
    酶活定义:每 1 万个细菌或细胞每小时消耗 1μmol NaOH 定义为一个酶活单位 U
    PE 活性(μmoL/min/104 cell)=20×V2÷(V1÷V×500)÷T×D =0.06×V2×D
    V1---加入离心管或试管中的上清液体积,1mL
    V---提取液体积,1.5mL
    V2---滴定所消耗的试剂四的量,mL
    T---反应时间,60 min=1h
    D---样品稀释倍数; W---样品质量,g20---试剂四的NaOH 浓度,20μmol/mL
    500---细菌或细胞总数,500 万;
    Cpr----上清液蛋白质浓度(mg/mL),建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

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