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丙二醛(MDA)试剂盒
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Malondialdehyde (MDA) assay kit
3个月
瓦兰生物
4℃
96T/48T
丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量测试盒(货号:WS9010F 分光法 96 样)一、产品简介:丙二醛(MDA)是由于生物体官衰老或在逆境条件下受伤害,其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。它的含量与生物体衰老及逆境伤害有密切关系。MDA 在高温、酸性条件下,与硫代**妥酸(thiobarbituric acid,TBA)缩合,生成红色产物,在 532nm有最大吸收峰,进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量;同时测定 600nm 下的吸光度,利用 532nm 与 600nm 下的吸光度的差值计算 MDA 的含量。二、试剂盒的组分与配制试剂名称规格保存要求备注提取液液体 110mL×1 瓶4℃保存工作液液体 60mL×1 瓶4℃避光保存若有沉淀析出,可 50℃水浴 10min,溶解备用三、所需的仪器和用品:可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。四、丙二醛(MDA)的测定:建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!1、样本制备:① 组织样本:称取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取。② 细菌/细胞样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行匀浆(使用各类常见电动匀浆器或超声破碎)。4ºC 约 12,000rpm 离心 10min,取上清作为待测样品。【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。③ 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。2、上机检测① 打开分光光度计预热 30min,蒸馏水调零,同时水浴锅加热到 90-95℃。② 在 EP 管中依次加入:试剂名称(μL)测定管工作液600样本400混匀后,在 90-95℃水浴中保温 30min,取出放冰上冷却,25℃,12000rmp 离心 10min,转移全部上清液于 1mL 玻璃比色皿中,分别于 532nm 和 600nm 处读取吸光度 A,ΔA= A532-A600。【注】:若是样本量极少的血清,可减少加样体积 V1(如由 400μL 减至 50μL,并用生理盐水或蒸馏水补齐 400μL),则改变后的加样量 V1 需重新代入公式计算。本试剂盒仅供科研使用2五、结果计算:1、按样本鲜重计算:MDA 含量(nmol/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d) ×V2×109]÷(W×V1÷V)= 16.1×ΔA÷W2、按细胞数量计算:MDA 含量(nmol/104 cell)=[ΔA÷(ε×d) ×V2×109]÷(500×V1÷V)=0.032×ΔA3、按液体体积:MDA 含量(nmol/ mL)=[ΔA÷(ε×d) ×V2×109]÷V1=16.1×ΔAV---样本提取液的总体积,1 mL;V1---加入反应体系样本体积,0.4mL;V2---样本提取液与工作液总反应液体积,1×10-3 L; d---比色皿光径,1cm;ε---MDA 摩尔消光系数,155×103 L / mol /cm;W---样本质量,g。500---细胞数量,万
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