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超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒
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Superoxide Dismutase (SOD) assay kit
3个月
瓦兰生物
4℃
48T/96T
超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(货号:WS1010F-1 分光法 48 样)一、产品简介:超氧化物歧化酶(SOD)(EC 1.15.1.1)在动植物、微生物和培养细胞体内广泛存在,其具有抗衰老、提高机体对多种疾病的抵抗力,能增强机体对外界环境的适应力,是生物体内一种重要的抗氧化酶。目前有多种 SOD 活性测定法,其中 NBT(氮蓝四唑)法产生的甲臜染料水溶性差,易和被还原的黄嘌呤氧化酶相互作用,抑制百分率达不到 100%等,从而使检测的灵敏度和精确度受到影响;本试剂盒采用的是目前稳定性更好、灵敏度更高的 WST-8 法,WST-8可以和黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase, XO)催化产生的超氧化物阴离子(O2.- )反应产生水溶性的甲臜染料,后者在 450nm 处有最大吸收;SOD 可清除 O2.-.,从而抑制甲臜的形成;反应液颜色越深,说明 SOD 活性愈低,反之活性越高。二、试剂盒组分与配制:试剂名称规格保存要求备注提取液液体 60mL×1 瓶4℃保存试剂一液体 16mL×1 瓶4℃保存试剂二液体μL×3 支4℃保存临用前离心或甩几下使试剂落入底部,每支分别加 1.1 mL 蒸馏水充分溶解,-20℃保存。试剂三液体 1.5mL×1 支4℃保存试剂四粉剂×5 支4℃保存临用前甩几下,使粉剂落到底部,每支加0.1mL 试剂五振荡或超声 溶解 后,再 加3.9mL 蒸馏水混匀使用(务必加 0.1mL 试剂五溶解后再加水),一周内用完。试剂五液体 1mL×1 支4℃保存三、所需的仪器和用品:可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、可调式移液器、研钵。四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!1、样本制备:① 组织样本:取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC或冰浴进行匀浆(或用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取② 细菌/细胞样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。2、上机检测:① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 450nm,蒸馏水调零。② 测定前将试剂一、三和四 25℃水浴 5min 以上。
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