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- WS1010F
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- 2025年12月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Superoxide Dismutase (SOD) assay kit
- 保质期：
3个月
- 供应商：
瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T/96T
| 规格： | 48T | 产品价格： | ￥430.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 96T | 产品价格： | ￥820.0 |
本试剂盒仅供科研使用
1
超氧化物歧化酶(SOD)—WST-8 法活性测定试剂盒说明书
（货号：WS1010F-1 分光法 48 样）
一、产品简介：
超氧化物歧化酶（SOD）（EC 1.15.1.1）在动植物、微生物和培养细胞体内广泛存在，
其具有抗衰老、提高机体对多种疾病的抵抗力，能增强机体对外界环境的适应力，是生
物体内一种重要的抗氧化酶。
目前有多种 SOD 活性测定法，其中 NBT(氮蓝四唑)法产生的甲臜染料水溶性差，易和
被还原的黄嘌呤氧化酶相互作用，抑制百分率达不到 100%等，从而使检测的灵敏度和
精确度受到影响；本试剂盒采用的是目前稳定性更好、灵敏度更高的 WST-8 法，WST-8
可以和黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase, XO)催化产生的超氧化物阴离子(O
2 .-
)反应产生
水溶性的甲臜染料，后者在 450nm 处有最大吸收；SOD 可清除 O
2 .-.
，从而抑制甲臜的形
成；反应液颜色越深，说明 SOD 活性愈低，反之活性越高。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 16mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体μL×3 支
4℃保存
临用前离心或甩几下使试剂落入底部，每支
分别加 1.1 mL 蒸馏水充分溶解，-20℃保存。
试剂三
液体 1.5mL×1 支
4℃保存
试剂四
粉剂×5 支
4℃保存
临用前甩几下，使粉剂落到底部，每支加
0.1mL 试剂五振荡或超声溶解后，再加
3.9mL 蒸馏水混匀使用（务必加 0.1mL 试剂
五溶解后再加水），一周内用完。
试剂五
液体 1mL×1 支
4℃保存
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、可调式移液器、研钵。
四、超氧化物歧化酶（SOD）的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4ºC
或冰浴进行匀浆(或用各类常见匀浆器)。4ºC×12000rpm 离心 10min，取上清作为待测液。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，
重复 30 次）；12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
② 测定前将试剂一、三和四 25℃水浴 5min 以上。本试剂盒仅供科研使用
2
③ 试剂四每次加样前务必混匀，保证试剂的均一性。
④ 在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入：
试剂名称（μL） 样本管
样本对照管*
（可选做）
空白管 1
（仅做一次）
空白管 2
（仅做一次）
试剂一
280
280
280
280
试剂二
60
60
蒸馏水
60
60
120
样本
60
60
试剂三
30
30
30
30
试剂四
320
320
320
320
充分混匀，室温（25℃）避光静置 30min（准确时间）后，于 450nm
测定各管吸光值 A。
【注】： 1、若样本量较多，测定前可将试剂一、三和四按照 280μL:30μL:320μL 比例混成一个混合液（需
依据当次检测的样本数量混合对应的试剂量），每管务必最后一步加 630μL 该混合液。
2、样本对照管*：提取后样本颜色较深：如棕褐色或黄色，或 A 对照管值>0.1，可做此管，否则
抑制率偏低，即 SOD 活性偏低。若为相同样本可做一组样本对照管，若每个样本都做对照
管则该试剂盒由原来可测 48 样变为 24 样。
3、若样本管数值过低，可能是：①试剂二或试剂四没有现配现用；②没有按顺序加试剂；③反应
温度需室温（25℃）。
五、结果计算：
1、抑制百分率的计算：
抑制百分率=[(A
空白管 1
-A
空白管 2
)-(A
样本管
-A
样本对照管*
)]/(A
空白管 1
-A
空白管 2
)×100%
若没有做 A
样本对照管
则值为 0 代入公式计算抑制百分率；控制样本的抑制百分率在 30-80%
范围内。1：若抑制百分率小于 30%，则需重新准备浓度比较高的待测样本；2：若大
于 80%，则需将样本粗提液用蒸馏水或提取液适当稀释。
2、SOD 酶活性计算：
SOD 酶活单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为 50%时，反应体系中
的 SOD 酶活力定义为一个酶活力单位(U/mL)。
a.按样本鲜重计算：
SOD 活性(U/g 鲜重)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V2]÷(W×V1÷V)×D
=12.5×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷W×D
b.按样本蛋白浓度计算：
SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V2]÷(V1×Cpr)×D
=12.5×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷Cpr×D
c.按细胞数量计算：
SOD 活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×V2]÷(500×V1÷V)×D
=0.025×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×D
d.按液体体积计算：
SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V2]÷V1×D
=12.5×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×D
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入反应体系中样本体积，0.06mL；
V2---反应体系总体积，0.75mL；
D---样本稀释倍数，未稀释即为 1；
W---样本质量，g；
500--细胞数量，万；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL ；建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
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超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒-WST-8法
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