过氧化物酶(POD)试剂盒

过氧化物酶(POD)试剂盒
（货号:WS7010F-1 分光法 48 样）
一、产品简介：
过氧化物酶（POD，EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，
是普遍存在的一种重要的氧化还原酶，其活性高低与抗性密切相关。在过氧化物酶催化
下，H2O2 氧化愈创木酚生成红棕色产物，该产物在 470nm 处有最大光吸收，故可通过
测 470nm 下吸光值变化测定过氧化物酶活性。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 50mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 2mL×1 瓶
4℃保存
三、需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵
四、过氧化物酶（POD）的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，进行
冰浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 470nm，蒸馏水调零。
② 测定前将试剂一、二和三解冻至室温（25℃）。
③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入：
试剂名称（µL）
测定管
样本
40
试剂一
160
试剂二
560
试剂三
40
混匀，立即在 470nm 处读取吸光值 A1，
1 分钟后读取 A2，△A=A2-A1。
【注】：1. 该反应很迅速，加完试剂三即启动反应，所以试剂三加完需立即检测，若 A1 值大于 1 或ΔA 大
于 1，可降低样本量 V1（如减至 20µL，则试剂二相应增加），改变后的 V1 需代入公式重新计算。
本试剂盒仅供科研使用
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2. 若ΔA 小于 0.005，可增加样本量 V1（如减至 80µL，则试剂二相应减少），或可延长反应时间 T
（如延长到 5min 后读取 A2），则改变后的 V1 和 T 需代入公式重新计算。
3. 若上升趋势不稳定，可全部加完稳定几分钟后再读取 A1，选取一段线性增长范围读取 A2。
4. 若检测体系不变，可按照样本检测数量，预先把试剂一和二和三按照 160:560:40 比例配成所需
体积的混合液，在加样表中直接加一枪 760µL 混合液即可。
五、结果计算：
1、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织每分钟在反应体系中使 470nm 处吸光值增加 0.5 为一个酶活力单位 U。
POD（△OD470 /min/g 鲜重）＝ΔA÷(W× V1÷V)÷0.5÷T =50×ΔA÷W
2、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟在反应体系中使 470nm 处吸光值 0.5 为一个酶活力单位 U。
POD（△OD470 /min/mg prot）＝ΔA÷（V1×Cpr）÷0.5÷T =50×ΔA÷Cpr
3、按细胞数量计算：
酶活定义：每 104个细胞每分钟在反应体系中使 470nm 处吸光值 0.5 为一个酶活力单位 U。
POD（△OD470 /min/104cell）=ΔA÷(500×V1÷V)÷0.5÷T=0.1×ΔA
4、按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体每分钟在反应体系中使 470nm 处吸光值增加 0.5 为一个酶活力单位 U。
POD（△OD470 /min/mL）=ΔA÷V1÷0.5÷T =50×ΔA
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.04mL；
T---反应时间，1 min；
W---样本质量；
500---细胞数量；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。