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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
99
- 现货状态:
仓库常备现货,国内现货7天左右
- 规格:
24块/箱
II 试剂与材料
-超低吸附细胞培养板/皿/瓶
-细胞培养液
-移液枪头
-自动移液枪
-恒温水浴锅
-生物安全柜
-37oC/5%二氧化碳培养箱
III预处理(紧急情况下,此步骤可忽略)
1. 将超低吸附细胞培养板/皿/瓶外包装70-75%酒精消毒后,迅速置于生物安全柜中,撕开外包装取出培养板/皿/瓶,放置备用。
2. 紫外消毒15分钟(紧急情况下,此步骤可忽略)。
IV 细胞悬液的加入和培养
1. 准备好所培养的细胞悬液。
2. 按需将细胞悬液沿孔壁加入预处理过的超低吸附细胞培养板/皿/瓶中。
3. 铺板密度推荐
间充质干细胞:3*104个活细胞/cm2
血管内皮细胞:3*104个活细胞/cm2
Huh7/HepG2:96U型底,1000个活细胞/孔
细胞类型不同,细胞成团的密度不同,需要研究者自行摸索最佳密度。
4. 用细胞培养液补至总体积到推荐培养液量(见附表)。注意:切记不能剧烈摇动培养板/皿/瓶,或者震荡培养,会破坏超低吸附水粘胶,导致细胞无法成团。
5. 将加好细胞的培养板置入37°C / 5%二氧化碳培养箱中培养,一般情况下12小时开始可成团,不同细胞类型可能成团时间不同,建议成团时间控制在12-96小时之间。
6. 48小时换液,可采用半量换液,即取出一半培养基,加入一半新鲜培养基。
注意:不建议重复利用培养板/皿/瓶。
附表. 培养板/皿/瓶参数与液体加入推荐量
| 培养板 | 培养面积(cm2) | 高度(带盖mm) | 推荐培养液量 |
| 6W | 9.5 | 23 | 2mL |
| 12W | 3.6 | 23 | 1mL |
| 24W | 1.9 | 23 | 0.5mL |
| 48W | 0.88 | 23 | 0.3mL |
| 96/96U/96V | 0.32 | 16 | 0.1mL |
| 35mm | 8.5 | 12 | 2mL |
| 60mm | 22.9 | 15 | 5mL |
| 100mm | 57.6 | 20 | 10mL |
| 150mm | 150.1 | 25 | 25-30mL |
| T25 | 25 | 20 | 5mL |
| T75 | 75 | 35 | 10mL |
| T175 | 175 | 40 | 30mL |
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售后有效期与提供的原始数据:
成团问题:48小时以内细胞无法成团;提供相差显微镜照片。
污染问题:96小时以内发现污染;提供相差显微镜照片。
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文献和实验小鼠肿瘤样本制备 颈椎脱臼法将荷瘤小鼠处死,75% 酒精浸泡 5 min,取出小鼠置于无菌操作台上。 左手持镊子,右手持弯剪,沿肿瘤边缘剪下长约 1cm 的口子,可清晰看见肿瘤附着于皮下,沿肿瘤边缘轻轻剪开连接处,剥离肿瘤。 将剥离的肿瘤放入100 mm 的培养皿中,并在室温下加入 5~10 mL 的 1640 基础培养基。 单细胞悬液的制备 A.混合酶消化法 待所有肿瘤剥离完毕后,将肿瘤转移至 1.5 mL EP 管中,手持弯剪将肿瘤充分剪碎,边剪边加入1640基础培养基,静置数秒
,5%CO2 的培养箱中培养至细胞汇合度 70-80% 时进行传代。 3、吸去 MEFs 培养基,将 iPSCs 接种于明胶上,添加 10ml iPSCs(I)培养基,放置在 37℃,5%CO2 的培养箱中培养 3-5 天。 定向内胚层分化 4、在 60mm 培养皿中加入 2ml Matrigel,室温静置 2h 并添加 DMEM-F12 培养基至完全没过 Matrigel。 5、用不含 Ca2+/Mg2+ 的 PBS 冲洗 iPSCs 后,加入 300μl Accutase,37℃ 孵育
3 - - - - - - 6.45mM - - - Transferrin - - - - - - 10.7ng/ml - - - CJ41 TGFβ1 - - - - - - 2ng/ml - - - CA59 Y27632 - - - - - - 10μM - - - ESCs 培养和传代 1、将 100mm 培养皿包被 5ml
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