弯曲杆菌PCR试剂盒

弯曲杆菌PCR试剂盒

英文名称：Campylobacter spp. PCR Kit
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。本产品就是以染料法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测弯曲杆菌的试剂盒。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增弯曲杆菌，与其他病原没有交叉反 应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

弯曲杆菌PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR Magic Mix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	弯曲杆菌 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	弯曲杆菌 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

一、样品 DNA 的制备 1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。 2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 弯曲杆菌 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液而 得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上 待用。 二、设置 PCR 反应（40μL 体系） 3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照 PCR Magic Mix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL 弯曲杆菌 PCR 引物混合 各 2 μL 2 μL 2 μL液 N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - - PCR 阴性对照（水） - 18 μL - PCR 阳性对照（弯曲杆菌 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液） - - 18 μL4. 按下表设置 PCR 反应： 过程 温度 时间 预变性 95℃ 5 min PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 30 sec 55℃ 30 sec 72℃ 30 sec 最后延伸 72℃ 10 min 三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑 制剂的感染。



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