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800
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武汉天德
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48例,96芯,双芯布阵。
骨髓瘤组织芯片,48例,96芯,包括12例正常骨髓组织及36例骨髓瘤组织,双芯布阵。
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文献和实验5 ml培养基的培养瓶,接种10倍系列稀释的骨髓瘤细胞。1周后到细胞相当密而又未长过的一瓶重新移植。典型的倍增时间为14-16小时。 骨髓瘤细胞悬液的制备方法如下: a、 于融合前48-36小时,将骨髓细胞扩大培养(一般按一块96孔板的融合试验约需2-3瓶100 ml培养瓶培养的细胞进行准备)。 b、 融合当天,用弯头滴管将细胞从瓶壁瘤轻轻吹下,收集于50 ml离心管或融合管内。 c、 1000 r/min离心5-10分钟,弃去上清。
细胞维持在含10%小牛血清的培养基中,方法是用6个装5ml培养基的培养瓶,接种10倍系列稀释的骨髓瘤细胞。1周后到细胞相当密而又未长过的一瓶重新移植。典型的倍增时间为14-16小时。骨髓瘤细胞悬液的制备方法如下①于融合前48-36小时,将骨髓细胞扩大培养(一般按一块96孔板的融合试验约需2-3瓶100ml培养瓶培养的细胞进行准备)。②融合当天,用弯头滴管将细胞从瓶壁瘤轻轻吹下,收集于50ml离心管或融合管内。③1000r/min离心5-10分钟,弃去上清。④加入30ml不完全培养基,同法离心洗涤一次
影印 到15cm SD/-Leu 平板上。 3)生长48-72 小时,观察菌落生长情况,每个菌落长至3-5mm,分别印至绒布上。 再从绒布上影印到15cm 2xYPD 平板上。Y190 菌(携带PGB-X 诱饵质粒)的 96 个克隆和Y187 菌(携带pACT2-小文库基因质粒)的96 个克隆一一对齐, 影印到一起,使其发生Mating。30℃培养20~24 小时。 4)Mating 完成, 再用绒布把菌落从2xYPD 平板影印至 SD/-Trp-Leu-His+30mM
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