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- XY-SH125
- 国产
- 2025年11月07日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
12
- 英文名：
Hephaestin,HP
- CAS号：
/
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/48样
微量法100管/48样
注 意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
Hephaestin (HP)作为铜蓝蛋白的同系物,是近年来发现的铁转运蛋白亚铁氧化酶，HP属亚铁氧化酶家族成员,具有亚铁氧化酶的活性,参与体内铁代谢。HP的表达可受铁、铜及锌等金属离子的调节。HP催化Fe2+氧化生成Fe3+，在介导铁的跨膜转运中有重要作用。
测定原理：
HP催化Fe2+氧化为Fe3+，Fe2+和ferrozine反应显色，在560 nm下有特征吸光值。通过测定Fe2+的减少速率可测得亚铁氧化酶的活性。
自备用品：
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体60 mL×1瓶，4℃保存;
试剂二：液体1.5 mL×1瓶，4℃保存;
试剂三：液体11 mL×1瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：水（mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
- 酶标仪预热30 min以上，调节波长至560 nm。
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 试剂一 | 50 | 50 |
| 试剂二 | 10 | 10 |
| 样本 | 10 | 10 |
| 蒸馏水 | 30 | 30 |
| 试剂三 | 混匀，40℃静置30 min | 100 |
| 试剂三 | 100 | |
| 混匀，立即测定A对照和A测定，ΔA=A对照-A测定。(每个测定管需设一个对照管) | ||
HP活性计算:
标准曲线：y = 8.2135x - 0.0006，R2 = 0.9998；X为标准品浓度，μmol/mL；y为吸光值ΔA)
（1）按样本质量计算
单位定义：每g样本每分钟氧化1nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。
HP（nmol/min/g 鲜重）=（△A+0.0006）÷ 8.2135×V总÷T ÷(W× V样÷V样总)× 1000
= 40.58×（△A+0.0006）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg蛋白每分钟氧化1nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。
HP（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0006）÷ 8.2135×V总÷T ÷（Cpr×V样）
= 40.58×（△A+0.0006）÷Cpr
V总：反应体系体积，0.1 mL；V样：加入样本体积0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；1000，μmol到nmol的转换系数。
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文献和实验-Triton蛋白分级抽提试剂盒细胞膜NP-40 or RIPA膜蛋白抽提试剂盒蛋白分级抽提试剂盒细胞核RIPA核蛋白抽提试剂盒线粒体RIPA线粒体蛋白抽提试剂盒亚细胞定位蛋白抽提试剂盒蛋白酶磷酸酶抑制剂抑制剂蛋白酶或磷酸酶PMSF丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶Leupeptin 亮肽素抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶，如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤溶酶和组织蛋白酶BAprotinin 抑肽酶丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制纤维蛋白溶酶、激肽释放酶、胰蛋白
，震荡、洗涤后，浸泡于稀释后的辣根过氧化酶―葡萄球菌A蛋白液洗涤后将该膜放入新配制的底物显色液中，震荡，显色，清洗，照相。 1.2 试剂盒的临床应用 研究对象：①病人：诊断按胃镜及活检病理确定。同期均检测Hp抗体。第一阶段用全菌抗原（抗Hp抗体）。男741例，女459例，年龄为18岁～77岁（42岁±10岁）。第二阶段用商品化试剂盒Hp尿素酶抗原（抗Hp－u抗体）。男1015例，女660例，年龄为16岁～74岁（45岁±7岁）。两组匹配情况相近。②献血员：以上两阶段均有健康献血员同期
-) ，再与 HRP 标记的过氧亚**阴离子 (ONOO-) 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的过氧亚**阴离子 (ONOO-) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠过氧亚**阴离子 (ONOO-) 浓度。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成
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