基因合成及文库构建服务

基因合成及文库构建服务
基因合成服务
基因合成是指在体外合成双链DNA分子的一门技术。您只需要告诉我们您所需要的DNA序列，我们就会给您准确地合成。基因合成与寡核苷酸合成有所不 同，寡核苷酸是单链的，所能合成的最长片段仅为100nt左右，而基因合成则为双链DNA分子合成，所能合成的长度范围50bp-10 kb。英睿生物拥有成熟的基因合成技术，根据客户的需求，我们能以非常具有竞争力的价格和快捷的交货时间提供全基因合成服务。
文库构建技术服务
英睿生物结合多年构建文库的经验，现有酵母双杂交文库、SSH差减文库、cDNA文库构建。在文库构建流程（CLONTECH专利的BD Matchmaker™ library）基础上加入独特步骤,使文库中高丰度表达基因明显降低，从而使筛选时假阳性率明显降低，为您的科研提供更多的便利！
服务项目简介
1. 普通cDNA文库（质粒文库、噬菌体文库）构建
用Oligo(dT)或随机引物作逆转录引物，将合成的cDNA连接到适当的载体中获得cDNA文库。
（1）Total RNA的提取和mRNA的纯化。
（2）cDNA第一条链的合成。
（3）cDNA第二条链的合成。
（4）双链cDNA的修饰。探针标记技术：标记物有放射性和非放射性两种。非放射性：生物素、荧光素 标记方法:切口平移法、随机引物法、末端标记法、单链DNA探针标记、寡核苷酸探针标记法。
（5）双链cDNA的分子克隆。
（6）cDNA文库的扩增。
（7）cDNA文库鉴定评价。
2. 均一化文库构建
均一化cDNA文库是克服基因转录水平上巨大差异给文库筛选和分析带来障碍的有效措施，有利于研究基因的表达和序列分析。我们基于双链特异性核酸酶（Duplex-Specific Nuclease， DSN）的先进cDNA文库均一化技术构建均一化cDNA文库，能减低高丰度表达基因100倍以上，有效富集低丰度表达基因。
文库特点：无需反复杂交过程，均一化程度高；均一化后平均插入片断大小无明显变化。
3. 全长文库构建
利用公司专有技术，进行全长文库构建服务。尤其适合希望获得高比例全长基因的客户。 文库特点：不经过PCR过程，容易获得低丰度基因;全长比例高（全长比例>80%）；样品用量大，需要25 mg的mRNA，因此，不适合样品量少的材料。
4. 基因组DNA文库构建
公司具备构建以 puc 19 作为载体的基因组散弹法文库的成熟技术，拥有超声仪、电转仪等先进配套仪器、优秀的专业技术人员，可以为您提供从总 DNA 提取、随机剪切、载体连接、转化、扩增到保存的全程服务。同时，还可以为您作进一步的数据处理及信息分析。
技术原理
cDNA文库是在特定的组织或细胞中，以mRNA为模板逆转录形成的互补DNA（cDNA）与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌形成重组DNA克隆群，这样包含着细胞全部mRNA信息去除了内含子的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库，具有组织或细胞特异性。
从YAC(yeast artificial chromosome)库，或从BAC(bacterial artificial chromosome)库、PAC(P1 artificial chromosome)库中筛选相对应的克隆。YAC库的嵌合性严重且操作难度较大，已逐步为PAC库和BAC库取代。PAC系统是以噬菌体P1为基础的克隆系统，它可容纳70～100 kb的插入片段，并可选择性地区分重组子和非重组子，且同时有两套复制机制。单拷贝复制子可用于稳定克隆增殖，而多拷贝复制子则可在Lac操纵子的控制下用于DNA的制备。BAC系统是基于大肠杆菌中可大容量容纳基因且稳定性良好的F因子衍生而来的载体系统，可容纳超过100 kb的插入片段，BAC克隆的插入片段的平均长度为120 kb，最大可达到240 kb左右。良好的稳定性和操作的简便性是BAC系统的主要优点。由这些克隆入手，采用依赖于适当cDNA文库的方法、依赖于特征序列的方法或依赖于表达性质等方法获得候选cDNA。
基因组文库是含有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体。反应基因组的全部信息，用于基因组物理图谱的构建，基因组序列分析，基因在染色体上的定位，基因组中基因的结构和组织形式等。我公司利用基因组散弹法文库的成熟技术，构建基因组文库，并保证库容量和重组率。