NPC/HK-1 人鼻咽癌细胞

细胞特性

来源：鼻咽癌组织

形态：上皮样，贴壁生长

含量：>1x10⁶cells

规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

用途：仅供科研使用

细胞运输、保存及注意事项

	复苏细胞	冻存细胞
包装	充液的T25细胞培养瓶	1mL冻存管
运输条件	常温	干冰
保存方式	75%酒精消毒瓶壁，置于37℃恒温细胞培养箱	-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮/立即复苏
注意事项	①　收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们； ②　请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照，10X和20X各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据； ③　贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在运输过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中），加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收； ④　运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。

培养基及培养冻存条件准备：

完全培养基	1640 培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%
培养条件	气相：空气，95%；二氧化碳，5%；温度：37℃；培养箱湿度为70%-80%
冻存液	90%血清 + 10%DMSO，现用现配

细胞复苏、传代、冻存操作

（一）冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4~6mL完全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm/min离心3~5min，弃去上清液。加入1mL完全培养基重悬细胞后，均匀铺于含6~8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中，置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况。

注意：建议复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸造成人员伤害。

（二）细胞传代（建议以同等底面积的培养瓶/皿按照1：2比例传代）

①　待细胞密度达到80%~90%时，即可进行传代培养。

②　弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，吸净残余的PBS。

③　加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），显微镜下观察细胞大部分变圆并脱落，即可轻拍培养瓶至细胞全部脱落。迅速拿回操作台，加入2倍体积的、含10%FBS的培养基终止消化。

④　将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min离心3-5min，弃去上清液。

⑤　向细胞沉淀中加入1~2mL完全培养基重悬细胞，轻吹混匀。将细胞悬液按1：1比例均匀铺于2个新的培养瓶/皿中，添加6~8mL完全培养基，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

（三）细胞冻存

①　细胞冻存时，步骤同细胞传代的①~④，细胞计数后，加入配制好的细胞冻存液，重悬细胞，按照1×10⁶ ~ 1×10⁷个细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

②　将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。