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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
human Myogenic Cell line,HMC
- 库存:
999
- 供应商:
武汉赛奥斯生物科技有限公司
- 肿瘤类型:
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- 细胞类型:
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- 品系:
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- 组织来源:
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- 相关疾病:
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- 物种来源:
人
- 免疫类型:
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- 细胞形态:
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- 是否是肿瘤细胞:
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- 器官来源:
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- 运输方式:
常温/干冰
- 年限:
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- 生长状态:
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- 规格:
1×10⁶cells
人肾小球系膜细胞(HMC)
产品编号:CL-519h
细胞特性
形态:贴壁生长,成纤维细胞样
含量:>1x10⁶cells
规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
用途:仅供科研使用
细胞运输、保存及注意事项
复苏细胞 |
冻存细胞 |
|
包装 |
充液的T25细胞培养瓶 |
1mL冻存管 |
运输条件 |
常温 |
干冰 |
保存方式 |
75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒温细胞培养箱 |
-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮/立即复苏 |
注意事项 |
① 收货当天发现异常,请在 24 小时内及时联系销售人员,逾期视为收货良好! ② 冻存管形式:收货后及时置于-80℃冰箱保存,若长时间不使用,应过夜转移至液氮。复苏时每管一次用完不得留存; ③ T25 形式:收货后于培养箱中静置2-3h,再对细胞进行常规操作。请严格按照本说明操作,否则造成细胞失活等情形,不予提供补发服务。 |
|
培养基及培养冻存条件准备:
完全培养基 |
90%EMEM + 10%FBS |
培养条件 |
气相:空气,95%;二氧化碳,5%;温度:37℃;培养箱湿度为70%-80% |
冻存液 |
50%EMEM + 40%FBS + 10%DMSO |
细胞复苏、传代、冻存操作
(一)冻存细胞的复苏
① 冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中,迅速没入37℃水浴锅,摇晃冻存管加速溶解,以1min内全部溶解为宜;
② 在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完全培养基的离心管内,1000-1200rpm离心5min,弃去上清液,用1-2mL完全培养基重悬细胞;
③ 然后将细胞悬液加入到含有6-8mL完全培养基的T25瓶中,放入培养箱培养。
(二)细胞传代
① 将旧培养液吸除,PBS 清洗两遍后,加入 1-2mL 胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);
② 镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处,肉眼可见细胞层脱落,即消化完成,否则继续消化),直接吸掉胰酶,加入 5-6 毫升完全培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散;
③ 将细胞悬液按1:2 比例分到新的 T25 瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养;
④ 注意培养基 pH 值变化和细胞密度,定期换液(每周 2-3 次),待细胞密度达到 80%-90%时,重复传代操作或者冻存。
注意事项:细胞具有密度依赖性,首次传代(密度达到 80%),建议 1:2传代(保持细胞密度),且优先在 T25 瓶中。密封培养瓶的话,处理完后放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松。
(三)细胞冻存
① 细胞冻存时,细胞计数后加入配制好的细胞冻存液,重悬细胞,按照1×106 ~ 1×107个细胞/mL分配到一个冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
② 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80℃冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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