- ￥5998
- 翌圣生物（Yeasen）
- 36716ES96
- 上海
- 2026年02月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
Protein A ELISA Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 保存条件：
2-8℃保存
- 规格：
96T
产品描述Protein A纯化介质由于与大多数抗体有特异性吸附，因此被广泛地用于抗体药物生产过程中，其中Protein A通过共价键与纯化介质结合，但在纯化过程中Protein A有一定脱落几率而残留下来。Protein A ELISA Kit是一款能够准确定量样品中残留Protein A的ELISA试剂盒，可用于抗体纯化过程中的工艺优化、关键质量参数评价以及中间产品和终产品中的Protein A残留量检测。
本试剂盒应用双抗夹心酶联免疫检测（ELISA）的实验原理进行Protein A残留量检测，将Protein A标准品和待测样品加入预包被抗Protein A抗体的Protein A捕获微孔板条（36716-A），然后加入稀释后的生物素标记的Protein A检测抗体（36716-C），最后加入Streptavidin-HRP（SA-HRP）（36716-D），形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP 复合物，洗板后加入TMB显色液（36716-F）显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液（36716-G）的作用下最终转换成黄色。黄色的深浅与样品中被检测到的Protein A的量呈正相关。
产品组分
【注】：
1. 36716-H稀释液1（5×）用于标准品和样品的稀释；
2. 36716-I稀释液2用于检测抗体和Streptavidin-HRP的稀释；
运输储存方法1. 冰袋运输。2-8℃保存，有效期12个月；
2. 收到货后，请检查各组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存；
3. 请在有效期内使用该产品，禁止不同批次的相关试剂进行混用。
注意事项1. 使用本试剂前请仔细阅读本说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应时间控制及加样操作；
2. 每个组分在使用前都应混匀，低速离心；
3. 所有试剂在打开之前，需要置于室温至少30分钟；
4. 贴壁加样，保证不同管/孔间加样体积一致，建议润洗吸头；
5. 洗板后向孔板加样前，需要确保板内洗液已被拍除干净；
6. 每步向孔板中加样前，需确保孔内无可见异物；
7. 吸取不同液体前，需要更换新的吸头；
8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
9. 避免终止液和显色液接触皮肤、眼睛或衣服，建议佩戴护目镜；
10. 本产品仅作科研用途。
适用机型包含但不限于以下仪器：
Molecular Devices：M和i系列
实验前准备一、本试剂盒未提供但实验所需的实验材料：
1. 量筒、1000mL烧杯、不同规格的EP管；
2. 无尘纸（用于洗板后拍板）；
3. 无菌吸头；
4. 样品前处理板；
5. 去离子水或双蒸馏水；
二、本试剂盒未提供但实验所需的实验设备和仪器：
1. 金属浴/水浴锅
2. 37℃恒温箱
3. 全自动洗板机
4. 旋涡混匀仪、离心机
5. 不同规格的精密微量移液器、多通道微量移液器
6. 计时器、4℃冰箱
7. 能够检测450nm和630nm吸光度的酶标仪；
实验方法
一、试剂、抗体准备：
1.1×洗液
根据所需的量，用去离子水或双蒸水按1:20的比例，将浓缩洗液（20×）稀释20倍，最终得到1×洗液。
举例：取50 mL的浓缩洗液（20×）加入950 mL的去离子水中配成1000 mL 1×洗液。
【注】：如果浓缩洗液（20×）中出现结晶，在50℃的水浴锅中温浴，直至结晶完全消失。
2.1×样品稀释液（稀释液1用于样品和标准品的稀释）
根据所需的量，用去离子水或双蒸水按1:5的比例，将稀释液1（5×）稀释5倍，最终得到1×样品稀释液。
【注】：如果稀释液1（5×）中出现结晶，在50℃的水浴锅中温浴，直至结晶完全消失。
3.1×Protein A检测抗体工作液
根据检测所需的量用稀释液2按照1:80的比例，将Protein A检测抗体（80×）稀释至1×。
4.1×HRP工作液
根据所需的量，用稀释液2按照1：500的比例，将HRP浓缩液（500×）稀释至1×。
二、Protein A标准品溶液制备
提前准备9个1.5mL离心管，参照下表，分别加入对应体积的1×稀释液1。随后参照下表稀释步骤依次制备标准品500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.625 pg/mL、7.813 pg/mL和0 pg/mL。注意各浓度标准品需要设置复孔。
表1 Protein A标准品溶液制备
三、样品准备
1.需要将样品蛋白浓度稀释至10mg/mL以下，较高的抗体浓度可能会干扰检测的准确度；
2.样品PH值调整到6.0-7.5的范围；
3.注意各待测样品需要设置复孔。
四、样本和标准品处理
由于脱落的Protein A可以结合抗体的Fc区，抗体-Protein A复合体会影响对Protein A的检出，所以实验前需要先将Protein A和抗体分开，本产品中使用加热方式进行Protein A和抗体分离。加热变性以后，抗体经过离心后沉淀，Protein A留于上清液中。具体实验步骤如下：
1.向离心管中加入不低于500 μL的待测样本和标准品（500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.625 pg/mL、7.813 pg/mL和0 pg/mL）；
2.每个样本中加入1%体积的吐温‐20（10%）（36716-E）至终浓度为0.1%，混匀；
3.离心管置于金属浴100℃或者沸水中保持10分钟；温冷却，11,000 rpm离心5分钟；
4.将含有Protein A的上清液转移至新的离心管中并做好标记。
【注】：若待测样品中Protein A浓度较高，用1×稀释液1稀释至标准曲线范围内再进行检测。
四、实验步骤
1.样品孵育：
1）从铝箔袋中取出需要的Protein A 捕获微孔板条，剩余板条密封好放回2-8℃保存。确保板条已在孔板架上固定好。
2）将预处理好的待测样品以及Protein A标准品（500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.625 pg/mL、7.813 pg/mL和0 pg/mL）各100 μL加入对应板孔中。
3）用封板膜封板，37℃孵育60分钟。
4）洗板：移去封板膜，弃去板孔中液体，每孔加入1×洗液250 μL，浸泡30秒，弃去洗液，重复洗涤4次。
【注】：本步骤可以在洗板机上完成。如用洗板机，请设置润洗，洗液体积不少于250 μL，吸液时间不少于0.8秒，浸泡时间不少于10秒，重复洗涤4次。
5）在无尘纸上拍板，将板孔中的残留液体拍干。
2.Protein A检测抗体孵育
1）向每孔中各加入1×Protein A检测抗体工作液100 μL。
2）用封板膜封板，37℃孵育60分钟。
3）洗板，同第1节“样品孵育”中的步骤4）。
4）在无尘纸上拍板，将板孔中的残留液体拍干。
3.Streptavidin-HRP（SA-HRP）孵育
1）每孔加入Streptavidin-HRP （SA-HRP）100 μL。
2）用封板膜封板，37℃孵育40分钟。
3）洗板，同第1节“样品孵育”中的步骤4）。
4）在无尘纸上拍板，将板孔中的残留液体拍干。
4.TMB反应和吸光值检测
1）每孔加入TMB显色液100 μL。
2）用封板膜封板，37℃避光反应15分钟。
3）移去封板膜，每孔加入终止液50 μL。
4）终止后10分钟内用酶标仪在450 nm与630 nm处测量吸光值。校准后的OD值为450nm的测定值减去630nm的测定值（OD450nm-OD630nm）。仅用450nm的测定值会导致OD值偏高，并且准确度降低。
5）以OD值为纵坐标，Protein A标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线，根据标准曲线计算出样品中Protein A的浓度。
6）典型的参考标准曲线如下（仅供参考，每次实验都需要制备标准曲线）：
本试剂盒应用双抗夹心酶联免疫检测（ELISA）的实验原理进行Protein A残留量检测，将Protein A标准品和待测样品加入预包被抗Protein A抗体的Protein A捕获微孔板条（36716-A），然后加入稀释后的生物素标记的Protein A检测抗体（36716-C），最后加入Streptavidin-HRP（SA-HRP）（36716-D），形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP 复合物，洗板后加入TMB显色液（36716-F）显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液（36716-G）的作用下最终转换成黄色。黄色的深浅与样品中被检测到的Protein A的量呈正相关。
产品组分
| 编号 | 组分 | 产品编号/规格 |
| 36716ES96 (96 T) | ||
| 36716-A | Protein A捕获微孔板条 | 1块（8孔×12条） |
| 36716-B | Protein A标准品（1 μg/mL） | 100 μL |
| 36716-C | Protein A检测抗体（80×） | 300 μL |
| 36716-D | Streptavidin-HRP（500×） | 60 μL |
| 36716-E | 吐温-20（10%） | 1 mL |
| 36716-F | TMB显色液 | 12 mL |
| 36716-G | 终止液 | 10 mL |
| 36716-H | 稀释液1（5×） | 10 mL |
| 36716-I | 稀释液2 | 50 mL |
| 36716-J | 浓缩洗液（20×） | 50 mL |
| 36716-K | 封板膜 | 5 张 |
1. 36716-H稀释液1（5×）用于标准品和样品的稀释；
2. 36716-I稀释液2用于检测抗体和Streptavidin-HRP的稀释；
运输储存方法1. 冰袋运输。2-8℃保存，有效期12个月；
2. 收到货后，请检查各组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存；
3. 请在有效期内使用该产品，禁止不同批次的相关试剂进行混用。
注意事项1. 使用本试剂前请仔细阅读本说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应时间控制及加样操作；
2. 每个组分在使用前都应混匀，低速离心；
3. 所有试剂在打开之前，需要置于室温至少30分钟；
4. 贴壁加样，保证不同管/孔间加样体积一致，建议润洗吸头；
5. 洗板后向孔板加样前，需要确保板内洗液已被拍除干净；
6. 每步向孔板中加样前，需确保孔内无可见异物；
7. 吸取不同液体前，需要更换新的吸头；
8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
9. 避免终止液和显色液接触皮肤、眼睛或衣服，建议佩戴护目镜；
10. 本产品仅作科研用途。
适用机型包含但不限于以下仪器：
Molecular Devices：M和i系列
实验前准备一、本试剂盒未提供但实验所需的实验材料：
1. 量筒、1000mL烧杯、不同规格的EP管；
2. 无尘纸（用于洗板后拍板）；
3. 无菌吸头；
4. 样品前处理板；
5. 去离子水或双蒸馏水；
二、本试剂盒未提供但实验所需的实验设备和仪器：
1. 金属浴/水浴锅
2. 37℃恒温箱
3. 全自动洗板机
4. 旋涡混匀仪、离心机
5. 不同规格的精密微量移液器、多通道微量移液器
6. 计时器、4℃冰箱
7. 能够检测450nm和630nm吸光度的酶标仪；
实验方法
一、试剂、抗体准备：
1.1×洗液
根据所需的量，用去离子水或双蒸水按1:20的比例，将浓缩洗液（20×）稀释20倍，最终得到1×洗液。
举例：取50 mL的浓缩洗液（20×）加入950 mL的去离子水中配成1000 mL 1×洗液。
【注】：如果浓缩洗液（20×）中出现结晶，在50℃的水浴锅中温浴，直至结晶完全消失。
2.1×样品稀释液（稀释液1用于样品和标准品的稀释）
根据所需的量，用去离子水或双蒸水按1:5的比例，将稀释液1（5×）稀释5倍，最终得到1×样品稀释液。
【注】：如果稀释液1（5×）中出现结晶，在50℃的水浴锅中温浴，直至结晶完全消失。
3.1×Protein A检测抗体工作液
根据检测所需的量用稀释液2按照1:80的比例，将Protein A检测抗体（80×）稀释至1×。
4.1×HRP工作液
根据所需的量，用稀释液2按照1：500的比例，将HRP浓缩液（500×）稀释至1×。
二、Protein A标准品溶液制备
提前准备9个1.5mL离心管，参照下表，分别加入对应体积的1×稀释液1。随后参照下表稀释步骤依次制备标准品500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.625 pg/mL、7.813 pg/mL和0 pg/mL。注意各浓度标准品需要设置复孔。
表1 Protein A标准品溶液制备
| 管号 | 标准品浓度 | 移取 | 1×稀释液1 | 标准品终浓度 |
| 1 | 1 μg/mL标准品（36716-B） | 5 μL | 995 μL | 5 ng/mL |
| 2 | 5 ng/mL 标准品（管1） | 100 μL | 900 μL | 500 pg/mL |
| 3 | 500 pg/mL标准品（管2） | 500 μL | 500 μL | 250 pg/mL |
| 4 | 250 pg/mL标准品（管3） | 500 μL | 500 μL | 125 pg/mL |
| 5 | 125 pg/mL的标准品（管4） | 500 μL | 500 μL | 62.5 pg/mL |
| 6 | 62.5 pg/mL的标准品（管5） | 500 μL | 500 μL | 31.25 pg/mL |
| 7 | 31.25 pg/mL的标准品（管6） | 500 μL | 500 μL | 15.625 pg/mL |
| 8 | 15.625 pg/mL的标准品（管7） | 500 μL | 500 μL | 7.813 pg/mL |
| 9 | 1×样品稀释液 | / | 500 μL | 0 pg/mL |
三、样品准备
1.需要将样品蛋白浓度稀释至10mg/mL以下，较高的抗体浓度可能会干扰检测的准确度；
2.样品PH值调整到6.0-7.5的范围；
3.注意各待测样品需要设置复孔。
四、样本和标准品处理
由于脱落的Protein A可以结合抗体的Fc区，抗体-Protein A复合体会影响对Protein A的检出，所以实验前需要先将Protein A和抗体分开，本产品中使用加热方式进行Protein A和抗体分离。加热变性以后，抗体经过离心后沉淀，Protein A留于上清液中。具体实验步骤如下：
1.向离心管中加入不低于500 μL的待测样本和标准品（500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.625 pg/mL、7.813 pg/mL和0 pg/mL）；
2.每个样本中加入1%体积的吐温‐20（10%）（36716-E）至终浓度为0.1%，混匀；
3.离心管置于金属浴100℃或者沸水中保持10分钟；温冷却，11,000 rpm离心5分钟；
4.将含有Protein A的上清液转移至新的离心管中并做好标记。
【注】：若待测样品中Protein A浓度较高，用1×稀释液1稀释至标准曲线范围内再进行检测。
四、实验步骤
1.样品孵育：
1）从铝箔袋中取出需要的Protein A 捕获微孔板条，剩余板条密封好放回2-8℃保存。确保板条已在孔板架上固定好。
2）将预处理好的待测样品以及Protein A标准品（500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.625 pg/mL、7.813 pg/mL和0 pg/mL）各100 μL加入对应板孔中。
3）用封板膜封板，37℃孵育60分钟。
4）洗板：移去封板膜，弃去板孔中液体，每孔加入1×洗液250 μL，浸泡30秒，弃去洗液，重复洗涤4次。
【注】：本步骤可以在洗板机上完成。如用洗板机，请设置润洗，洗液体积不少于250 μL，吸液时间不少于0.8秒，浸泡时间不少于10秒，重复洗涤4次。
5）在无尘纸上拍板，将板孔中的残留液体拍干。
2.Protein A检测抗体孵育
1）向每孔中各加入1×Protein A检测抗体工作液100 μL。
2）用封板膜封板，37℃孵育60分钟。
3）洗板，同第1节“样品孵育”中的步骤4）。
4）在无尘纸上拍板，将板孔中的残留液体拍干。
3.Streptavidin-HRP（SA-HRP）孵育
1）每孔加入Streptavidin-HRP （SA-HRP）100 μL。
2）用封板膜封板，37℃孵育40分钟。
3）洗板，同第1节“样品孵育”中的步骤4）。
4）在无尘纸上拍板，将板孔中的残留液体拍干。
4.TMB反应和吸光值检测
1）每孔加入TMB显色液100 μL。
2）用封板膜封板，37℃避光反应15分钟。
3）移去封板膜，每孔加入终止液50 μL。
4）终止后10分钟内用酶标仪在450 nm与630 nm处测量吸光值。校准后的OD值为450nm的测定值减去630nm的测定值（OD450nm-OD630nm）。仅用450nm的测定值会导致OD值偏高，并且准确度降低。
5）以OD值为纵坐标，Protein A标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线，根据标准曲线计算出样品中Protein A的浓度。
6）典型的参考标准曲线如下（仅供参考，每次实验都需要制备标准曲线）：
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针对同一指标，生化试剂盒和 ELISA 试剂盒的检测结果趋势是一致的吗？
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