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- 服务名称：
数字PCR技术服务
- 提供商：
上海威奥生物
数字PCR技术服务
技术原理：
数字PCR( 也可称单分子PCR)包括两部分内容：PCR 扩增和荧光信号分析。在PCR 扩增阶段，与传统技术不同，数字PCR需要将样品稀释到单分子水平，并平均分配到几十至几万个单元中进行反应。不同于qPCR 对每个循环进行实时荧光测定的方法，数字PCR 技术是在扩增结束后对每个反应单元的荧光信号进行采集。最后通过直接计数或泊松分布公式计算得到样品的原始浓度或含量。数字PCR的定量方法不依赖于扩增曲线的循环阈值，因此不受扩增效率的影响，也不必采用看家基因和标准曲线，具有很好的准确度和重现性，可以实现绝对定量分析。在未来十年内，医学保健的目标是提供优质高效的个性化医疗。PCR 方法会在实现这个目标的过程中发挥重要作用。相比于传统的PCR，数字PCR 技术有着无可比拟的优势和广泛的应用前景。
数字PCR检测原理
数字PCR检测流程
应用领域：
- 突变/稀有变异检测（Mutation/Rare variant detection）
- 拷贝数变异（Copy-number variation）
- 进入外周循环（包括血液和粪便）的肿瘤组织核酸分析
- 无创产前筛查：
- 转化移植检测。
- 药理学（Pharmacogenetics）
- 基因表达分析（Gene expression analysis）-特别针对单细胞或少量细胞或者血清血浆样品
- 线粒体拷贝数分析与线粒体突变分析
- 数字PCR可以验证二代测序(NGS)
应用案例：
- Huggett JF, Foy CA, Benes V et al.(2013) The digital MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative digital PCR experiments. Clinical Chem 6:892–902.
- Absolute quantification by droplet digital PCRversus analog real-time PCR Christopher M Hindson et al. nature methods | VOL.10 NO.10 | OCTOBER 2013
- Detection of Cancer DNA in Plasma of Early Stage Breast Cancer Patients Julia A. Beaver*1, Danijela Jelovac February 19, 2014 American Association for Cancer Research
- Evaluation of a Droplet Digital Polymerase Chain Reaction Format for DNA Copy Number Quantification Leonardo B. Pinheiro, Victoria A. Coleman,November 28, 2011 American Chemical
- Qin J, Jones R C, Ramakrishnan R. Studying copy number variations using a nanofluidic platform. Nucleic Acids Res, 2008,36(18): e116
- Lo Y M D, Fiona M F, Chan K C A, et al. Digital PCR for the molecular detection of fetal chromosomal aneuploidy. Proc Natl Acad Sci USA, 2007, 104(32): 13116-13121
- Warren L, David B, Irving L W, et al. Transcription factor profiling in individual hematopoietic progenitors by digital RT-PCR. Proc Natl Acad Sci USA, 2006, 103(47): 17807-17812
- Ottesen E A, Jong W H, Stephen R Q, et al. Microfluidic digital PCR enables multigene analysis of individual environmental bacteria. Science, 2006, 314(5804): 1464-1467
- Tadmor A D, Elizabeth A O, Jared R L, et al. Probing individual environmental bacteria for viruses by using microfluidic digital PCR. Science, 2011, 333(6038): 58-62
- Tian Wang, Hongying Sha. , et al. Polar Body Genome Transfer for Preventing the Transmission of Inherited Mitochondrial Diseases。Cell 157, 1591–1604, June 19, 2014
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文献和实验而非保护不足。”水质监控的数字化在寻求建立一种更好的通过分析遗传标志来监测海岸水污染的技术方法的过程中，Cao博士及其同事调研了Bio-Rad的微滴式数字PCR (ddPCR™) 技术。这种PCR方法可将样本微滴化分割，通过对阳性微滴和阴性微滴的统计学分析获得数字化结果。Cao博士一开始就对ddPCR产生了兴趣，因为与qPCR不同的是，ddPCR不依赖标准曲线就可以获得定量结果。“我们想消除外部标准品带来的不确定性，”她说，“数字PCR的绝对定量能力可产生更具重复性的数据。”微滴式数字PCR
为什么你的 qPCR 重复性差？灵敏度低？扩增易受抑制？那是你还不知道数字 PCR
相信做 qPCR 的研友经常会碰到以下令人抓狂的时刻：三个重复的 Cqmax 和 Cqmin 能差到两个循环；提的样本中总是含有很多 PCR 抑制剂，导致 Cq 值偏大；极低丰度样本的 Cq 值总是游走在 40 和 N/A 边缘，让人崩溃；绝对定量时需要的标准品既没有商品化，自己制备起来又很费时费力……数不胜数的坑，等着有人来跳……那真的束手无策了吗？其实归结起来，qPCR 实验中碰到的难题无非是重复性差、扩增易受抑制、灵敏度低和需要标准曲线等，接下来介绍的 Digital PCR（数字
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