1.5ml离心管（无菌无酶）

小鼠脾脏单细胞悬液制备流程及注意事项

小鼠脾脏单细胞悬液制备流程 a)研磨法 小鼠颈椎脱臼处死，置于75%酒精浸泡5 min后，取出小鼠，置于无菌操作台上，左腹侧朝上。 小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏。 脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露出脾脏。用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏，并浸泡于干净的PBS溶液中。 将脾脏置于200目筛网中，用组织研磨棒轻轻研磨至没有明显红色块状物。 用15 mL PBS冲洗筛网，并将冲洗液收集于15 mL离心管，300 g离心5 min，弃上清

小鼠骨髓单细胞悬液制备流程及注意事项

），剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。注意在该过程中应保留尽可能多的骨髓腔。 拿一支1 mL的无菌注射器，吸取1 mL PBS，轻轻插入骨髓腔，冲洗骨髓腔以获得骨髓。重复2~3次，可冲出绝大部分细胞。冲洗完后，用移液器轻轻吹打细胞，将细胞团吹散。 将冲洗液用200目的滤网过滤，滤液收集于15 mL离心管中，300 g离心5 min，弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬细胞，细胞计数，并调整细胞浓度至1×107/mL。 注意事项： 骨髓样本细胞分群明显，可以裂解红细胞，也可不裂解。如需裂解红细胞，可以加入

类器官培养与应用——肺类器官

皿放置在 37℃ 条件下进行解离约 5-10min，直到所有的细胞都以小细胞块或单细胞的形式漂浮。 4、向每个孔中加入 5ml 的 DMEM-F12，以充分稀释 Dispase。 5、将所有细胞转移至离心管中，室温下 300g 离心 3min，收集沉淀细胞。加入 DMEM-F12 培养基，以 1:6 的比例接种在 Matrigel 包被的 24 孔培养板中，向每个孔中加入 0.5ml 预热的 mTeSR1 进行培养，至细胞汇合度达到 45-75%。   定向分化为内胚层和前肠球体 6、将 24 孔板