中大量高纯质粒提取试剂盒

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产品描述：

产品名称：中大量高纯质粒提取试剂盒

描述:
该产品是专门用于中大量菌液（5、10、20、50、100mL或以上）质粒DNA提取纯化的试剂盒。它采用独特的溶液配方，能高效地去除蛋白质、RNA、多糖和内毒素等杂质，同时还配置了经反复实验优选的高效离心吸附膜，对提取的质粒进行更进一步的纯化。可大幅提升洗脱液中质粒DNA的浓度，DNA浓度可达2ug/uL以上。试剂盒提取的质粒DNA纯度高，可高效去除质粒中的内毒素污染，提取得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、酶切、PCR、测序、体外转录与翻译、构建文库等多种分子生物学实验。

产品特点：
1、高效提取中大量菌液质粒DNA，可提取菌液量在50mL以上，提取质粒浓度高，洗脱液中质粒DNA浓度可达2ug/uL以上；
2、进口质粒纯化膜，提取质粒DNA纯度高，可高效去除内毒素污染，提升细胞转染的成功率；
3、用于培养菌液中质粒DNA的提取，提取后的质粒DNA可用于细胞转染、酶切、PCR、测序、体外转录与翻译、构建文库等多种分子生物学实验。
 

使用方法: (请根据需要自备异丙醇、乙醇、100mL、50mL离心管、20mL离心管或15mL离心管)
1. 取出洗涤液，按终浓度70%比例加入无水乙醇，如每3mL洗涤液加入7mL无水乙醇，充分混匀。
2. 取50mL菌液，置于100mL离心管中，4000rpm 离心5 min，彻底弃除上清。
3. 加入10ml溶液A，充分振荡2分钟，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在，转移到15mL离心管。4000rpm离心5min，彻底弃除上清。
4. 加入2ml溶液I和100ul溶液B，充分振荡2分钟，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。
5. 加入4ml溶液II，盖紧管盖，轻轻颠倒混匀6次，注意整个管子的内表面均需与溶液II接触，室温放置至溶液清亮。（一般为4-5min，如5min后溶液未变清亮，说明细菌过多，应考虑减少菌液量。注意混匀手法要温和，不要剧烈混合。溶液II取液后应尽快旋紧管盖。）
6. 加入3ml溶液III，盖紧管盖，立即轻轻颠倒混匀8次，4℃放置5min。（此步注意要尽快混匀，但手法要温和）
7. 4℃、10,000xg离心15min，小心吸出上清，轻移至新的15ml离心管。（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）
8. 加入3ml异丙醇，充分混匀。将吸附柱放置于15mL配套收集管中，吸取6mL上述溶液加入吸附柱中，10,000xg 离心1 分钟，弃收集管内废液。
9. 将吸附柱放回15mL配套收集管中，吸取剩余上述溶液加入吸附柱中，10,000xg 离心1 分钟，弃收集管内废液。
10. 将吸附柱放回收集管内，加3mL 洗涤液至吸附柱内，静置2min，10,000xg 离心1min，弃收集管内废液。
11. 将吸附柱放回收集管内，加2mL 洗涤液至吸附柱内，10,000xg 离心1min，弃收集管内废液。
12. 将吸附柱放回收集管内，10,000xg离心2min，离去残留的洗涤液。同时，按每份样本40μL 取洗脱液（如10份提取样本，即取400μL 洗脱液），放置于灭菌1.5mL离心管，65℃预热。
13. 取出吸附柱，放入新的15 mL离心管，向吸附柱膜中间加入40 μL 预热洗脱液，静置1min，10,000xg 离心2min，收集质粒DNA溶液。

储存/保存方法: 室温（10-30℃）保存, 溶液B请于2-8℃存放，有效期1年

注意事项:
1. 单只吸附柱质粒负载量在150ug左右，提取的菌液量应根据所含质粒量进行选择，如预估1mL菌液可提质粒2ug，则单次提取所取菌液不要超过75mL，如菌液较多，可分2管或多管进行。
2. 溶液II取液后应尽快旋紧管盖，密封避光保存，溶液II、溶液III如出现结晶或者沉淀，可在37℃水浴中加热几分钟溶解。
3. 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。 如所提质粒为低拷贝质粒或者大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加溶液I、溶液B、溶液II、溶液III、异丙醇等的用量。
4. 所用洗脱液的最小体积为30μL，可根据所提质粒的预估量和期望达到的质粒浓度选择合适的洗脱液用量，如预估提取的质粒量为80ug，期望的质粒浓度为2ug/uL，则选择40μL洗脱液进行洗脱。
本产品经严格的质量检验证明，无生物污染。

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