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参考试剂盒说明书,有效期12个月。
12个月
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爱必信(上海)生物科技有限公司
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50T/20T
规格: | 50T | 产品价格: | ¥1250.0 |
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规格: | 20T | 产品价格: | ¥578.0 |
公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于临床应用及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)!
产品描述: 产品名称:植物RNA快速提取试剂盒(DNase Ⅰ) 描述: 独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。每次可处理50~100mg植物组织,可用于RT-PCR、Northern blot等实验。是本公司超越了Qiagen 、Promega等公司同类产品质量的代表产品。
使用方法: 提示:1、第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶加入指定量无水乙醇! 2、操作前在裂解液 RLT 中加入β-巯基乙醇至终浓度 1%,如 1 ml RLT 中加入 10 μl β- 巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的 RLT 4℃可放置一个月。 操作:1、直接研磨法(推荐): (1)新鲜植物组织称重后取 100 mg 迅速剪成小块放入研钵(冰冻保存或者液氮保存样 品可直接称重后取 100 mg 放入研钵),加入 10 体积(1 ml)RLT(请确定已加入β- 巯基乙醇)和 1 体积(100 μl)PLANTaid 室温下充分研磨成匀浆,注意应该迅速 研磨让组织和裂解液 RLT 立刻充分接触以抑制 RNA 酶活性。 (2)将裂解物转入离心管,剧烈摇晃振荡 15 sec,12,000 rpm 离心 5-10 min,沉淀为不 能裂解的碎片和结合有多糖多酚的 PLANTaid,取 450 μl 裂解物上清转到一个新离 心管。(3)加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积),此时可能出现沉淀,但是不影响提取 过程,立即吹打混匀,不要离心。(4)立刻接操作步骤项下 3。2、液氮研磨法: (1)取 500 μl 裂解液 RLT(已经加入β-巯基乙醇),转入 1.5 ml 离心管中,加入 50 μl PLANTaid 混匀备用。(2)液氮中研磨适量植物组织成细粉后,取 50mg 细粉转入上述装有 RLT 和 PLANTaid 的离心管,立即用手剧烈振荡 20 sec,充分裂解。 在 56℃温育 1-3 min 有助于裂解植物,但是淀粉含量高的植物不能温育,因为提 高的温度可能导致淀粉膨胀。(3)用带钝针头的一次性 1 ml(配 0.9 mm 针头)注射器抽打裂解物 10 次或直到得到 满意匀浆结果(或者电动匀浆 30 sec),可以剪切 DNA,降低粘稠度和提高产量。(4)将裂解物 13,000 rpm 离心 5-10 min,沉淀为不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid,将所有裂解物上清转到一个新离心管。(5)较精确估计裂解物(上清)体积,加入 0.5 体积的无水乙醇,此时可能出现沉淀, 但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。(6)立刻接操作步骤项下 3。3、将混合物(每次小于 700 μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱 RA 中(吸附柱放 入收集管中),12,000 rpm 离心 60 sec,弃掉废液。4、加 350 μl 去蛋白液 RW1,室温放置 30 sec,12,000 rpm 离心 30 sec,弃掉废液。将 吸附柱 RA 放回收集管中。5、DNase I 工作液的配制:取 10 μl DNase I 储存液放入新的 RNase-free 离心管中,加入 70 μl RDD 溶液,轻柔混匀。6、向吸附柱 RA 中央加入 80 μl DNase I 工作液,室温放置 15 min(一般情况下室温放 置可得到较好的消化效果,如果室温效果不佳可选择在 37℃放置 15 min)。7、加 350 μl 去蛋白液 RW1,室温放置 30 sec,12,000 rpm 离心 30 sec,弃掉废液。将吸 附柱 RA 放回收集管中。8、加入 500 μl 漂洗液 RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000 rpm 离心 30 sec, 弃掉废液。加入 500 μl 漂洗液 RW,重复一遍。9、将吸附柱 RA 放回空收集管中,12,000 rpm 离心 2 min,将吸附柱置于室温放置数分 钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。10、取出吸附柱 RA,放入一个 RNase free 离心管中,根据预期 RNA 产量在吸附膜的中 间部位加 30-50 μl RNase free water(事先在 70-80℃水浴中加热效果更好),室温放 置 1 min,12,000 rpm 离心 1 min。11、如果预期 RNA 产量>30 μg,加 30-50 μl RNase free H2O 重复步骤 10,合并两次洗脱液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要 RNA 浓度高)。 洗脱两遍的 RNA 洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的 RNA 产量比前者高 15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。 储存/保存方法: 参考试剂盒说明书,有效期12个月。 注意事项: 1、需要自备一次性注射器(可选),研钵。 产品信息订购:
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