植物RNA快速提取试剂盒（DNase Ⅰ)

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产品描述：

产品名称：植物RNA快速提取试剂盒（DNase Ⅰ)

描述:

独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。每次可处理50～100mg植物组织，可用于RT-PCR、Northern blot等实验。是本公司超越了Qiagen 、Promega等公司同类产品质量的代表产品。

产品特点：
1、重复性好，离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小。
2、操作安全，不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3、简便快捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
4、PLANTaid的加入有助于多糖多酚含量高的植物RNA提取。
自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇 （Dnase I）

产品信息：

使用方法: 

提示：1、第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶加入指定量无水乙醇! 

2、操作前在裂解液 RLT 中加入β-巯基乙醇至终浓度 1%，如 1 ml RLT 中加入 10 μl β- 巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的 RLT 4℃可放置一个月。

操作： 1、直接研磨法（推荐）:

（1）新鲜植物组织称重后取 100 mg 迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样 品可直接称重后取 100 mg 放入研钵），加入 10 体积（1 ml）RLT(请确定已加入β- 巯基乙醇)和 1 体积（100 μl）PLANTaid 室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速 研磨让组织和裂解液 RLT 立刻充分接触以抑制 RNA 酶活性。

（2）将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡 15 sec，12,000 rpm 离心 5-10 min，沉淀为不 能裂解的碎片和结合有多糖多酚的 PLANTaid，取 450 μl 裂解物上清转到一个新离 心管。

（3）加入上清体积一半的无水乙醇（0.5 体积），此时可能出现沉淀，但是不影响提取 过程，立即吹打混匀，不要离心。

（4）立刻接操作步骤项下 3。

2、液氮研磨法:

（1）取 500 μl 裂解液 RLT(已经加入β-巯基乙醇)，转入 1.5 ml 离心管中，加入 50 μl PLANTaid 混匀备用。

（2）液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取 50mg 细粉转入上述装有 RLT 和 PLANTaid 的离心管，立即用手剧烈振荡 20 sec，充分裂解。 在 56℃温育 1-3 min 有助于裂解植物,但是淀粉含量高的植物不能温育，因为提 高的温度可能导致淀粉膨胀。

（3）用带钝针头的一次性 1 ml（配 0.9 mm 针头）注射器抽打裂解物 10 次或直到得到 满意匀浆结果（或者电动匀浆 30 sec），可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高产量。

（4）将裂解物 13,000 rpm 离心 5-10 min，沉淀为不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid，将所有裂解物上清转到一个新离心管。

（5）较精确估计裂解物（上清）体积，加入 0.5 体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀， 但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

（6）立刻接操作步骤项下 3。

3、将混合物（每次小于 700 μl，多可以分两次加入）加入一个吸附柱 RA 中（吸附柱放 入收集管中），12,000 rpm 离心 60 sec，弃掉废液。

4、加 350 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 30 sec，12,000 rpm 离心 30 sec，弃掉废液。将 吸附柱 RA 放回收集管中。

5、DNase I 工作液的配制：取 10 μl DNase I 储存液放入新的 RNase-free 离心管中，加入 70 μl RDD 溶液，轻柔混匀。

6、向吸附柱 RA 中央加入 80 μl DNase I 工作液，室温放置 15 min（一般情况下室温放 置可得到较好的消化效果，如果室温效果不佳可选择在 37℃放置 15 min）。

7、加 350 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 30 sec，12,000 rpm 离心 30 sec，弃掉废液。将吸 附柱 RA 放回收集管中。

8、加入 500 μl 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心 30 sec， 弃掉废液。加入 500 μl 漂洗液 RW，重复一遍。

9、将吸附柱 RA 放回空收集管中，12,000 rpm 离心 2 min，将吸附柱置于室温放置数分 钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

10、取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 离心管中，根据预期 RNA 产量在吸附膜的中 间部位加 30-50 μl RNase free water（事先在 70-80℃水浴中加热效果更好），室温放 置 1 min，12,000 rpm 离心 1 min。

11、如果预期 RNA 产量>30 μg，加 30-50 μl RNase free H2O 重复步骤 10，合并两次洗脱液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍（如果需要 RNA 浓度高）。 洗脱两遍的 RNA 洗脱液浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的 RNA 产量比前者高 15–30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。

储存/保存方法: 参考试剂盒说明书，有效期12个月。

注意事项:

1、需要自备一次性注射器（可选），研钵。
2、裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
3、关于DNA的微量残留: 由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜，在大多数 RT-PCR 扩增过程中极其微量的 DNA 残留（一般电泳 EB 染色紫外灯下观察不可见） 影响不是很大，如果要进行严格的 mRNA 表达量分析如荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
（1）选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。 （2）选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。

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