去内毒素中大量质粒富集提取试剂盒

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产品描述：

产品名称：去内毒素中大量质粒富集提取试剂盒
 

产品介绍：
这款产品是专门用于中大量菌液中质粒DNA去内毒素提取纯化的试剂盒。它采用独特的溶液配方，能高效地去除蛋白质、RNA、多糖和内毒素等杂质，洗涤液中添加了独特配方的内毒素清除因子，可高效清除提取质粒中残存的内毒素。鲎试剂测试表明，该试剂盒提取得到的质粒溶液，内毒素去除率可高达90%以上，可大幅提升细胞转染的效率。 Medi Enri EDTout还配置了经反复实验优选的高效离心吸附柱，配套真空浓缩装置，可大幅提升洗脱液中质粒DNA的浓度，DNA浓度可达2ug/uL以上，并可人为调节。它的操作简便，提取得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、酶切、PCR、测序、体外转录与翻译、构建文库等多种分子生物学实验。

产品特点：
1、高效提取中大量菌液质粒DNA，提取菌液量：5mL、10mL、20mL、50mL、100mL或以上；
2、提取质粒DNA纯度高，可高效去除质粒中污染的内毒素，内毒素去除率可高达90%以上，有效提升质粒转染实验的成功率；
3、真空浓缩，大幅提升洗脱液中质粒DNA浓度，DNA浓度可达2ug/uL以上；
4、用于培养菌液样本中质粒DNA的提取，提取后的质粒DNA可用于细胞转染、酶切、PCR、测序、体外转录与翻译、构建文库等多种分子生物学实验。

使用方法:
操作步骤(请根据需要自备异丙醇、乙醇、50mL离心管、20mL离心管或15mL离心管)
1. 取出洗涤液A和洗涤液B，按终浓度70%比例加入无水乙醇，如每3mL洗涤液A和洗涤液B各加入7mL无水乙醇，充分混匀。
2. 取30mL菌液，置于50mL离心管中，4000rpm 离心5 min，彻底弃除上清。
3. 加入5ml溶液A，充分振荡2分钟，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在，转移到15mL离心管。4000rpm离心5min，彻底弃除上清。
4. 加入1ml溶液I和50ul溶液B，充分振荡2分钟，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。
5. 加入2ml溶液II，盖紧管盖，轻轻颠倒混匀6次，注意整个管子的内表面均需与溶液II接触，室温放置至溶液清亮。（一般为4-5min，如5min后溶液未变清亮，说明细菌过多，应考虑减少菌液量。注意混匀手法要温和，不要剧烈混合。溶液II取液后应尽快旋紧管盖。）
6. 加入1.5ml溶液III，盖紧管盖，立即轻轻颠倒混匀8次，4℃放置5min。（此步注意要尽快混匀，但手法要温和）
7. 4℃、10000rpm离心15min，小心吸出上清，轻移至新的15ml离心管。（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）
8. 加入2.5ml异丙醇，充分混匀。（在此期间，准备富集装置）
9. 将富集吸附柱放在抽滤装置上，再将10mL无菌注射器针筒插入富集吸附柱上端，将上述溶液转入针筒内，真空抽滤至富集吸附柱内液体刚刚抽滤完毕（约2-10分钟，注意不要抽滤太干，太干不利于后续步骤开展）。
10. 向针筒内加2mL 洗涤液A，静置2分钟，真空抽滤至富集吸附柱内液体刚刚抽滤完毕（约1-5分钟，注意不要抽滤太干）。
11. 向针筒内加1mL 洗涤液B，抽滤2 分钟。同时，按每份样本30μL 取洗脱液（如10份提取样本，即取300μL 洗脱液），放置于灭菌1.5mL离心管，65℃预热。
12. 将富集吸附柱放入收集管内，加入0.6 mL无水乙醇，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃去收集管内的废液。
13. 将富集吸附柱放入收集管内，12,000 rpm 离心2 分钟，离去残留的乙醇。开盖，室温放置3分钟。
14. 取出富集吸附柱，放入新的1.5mL灭菌洁净离心管内，加入30 μL 预热的洗脱液，静置2分钟，12,000 rpm离心2 分钟，收集DNA溶液。
 

储存/保存方法: 室温（10-30℃）保存，溶液B2-8℃存放；有效期1年。
 

试剂盒组成：

注意事项:
1、 单只富集吸附柱质粒负载量在60ug左右，提取的菌液量应根据所含质粒量进行选择，如预估1mL菌液可提质粒2ug，则单个提取套装提取菌液不要超过30mL，如菌液较多，可分2管或多管进行。
2、 溶液II含碱性物质，洗涤液A含内毒素清除因子，取液完成后应立即旋紧管盖，密封保存。
3、 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。 如所提质粒为低拷贝质粒或者大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加溶液I、溶液B、溶液II、溶液III、异丙醇等的用量。
4、 所用洗脱液的最小体积为10 μL，可根据所提质粒的预估量和期望达到的质粒浓度选择合适的洗脱液用量，如预估提取的质粒量为40ug，期望的质粒浓度为2ug/uL，则选择20μL洗脱液进行洗脱。
本产品经严格的质量检验证明，无生物污染

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