ExoBrooch®外泌体RVG靶向肽修饰试剂盒-靶向神经系

 

一、产品介绍

 

ExoBrooch^®是恩泽康泰开发的脂锚试剂盒系列产品，基于相似相溶原理实现外泌体的表面修饰。RVG-FAM 脂锚试剂盒是 ExoBrooch^®中的一员，内含 PEG 胆固醇聚合的 FAM-RVG 靶向肽分子。胆固醇属于两亲物质，同时具有亲油和亲水两种基团，但其亲油性较亲水性强，与磷脂相互作用时可嵌入到磷脂分子之间，将所带目的分子连接在外泌体外表面，实现外泌体的表面修饰。RVG（YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG）是烟酰乙酰胆碱受体（Nicotinic acetylcholine receptor，nAChR）的靶向肽，常用于脑卒中、帕金森病等神经疾病的研究。FAM 为绿色荧光分子，激发光为 488 nm，发射光为 525nm。将三者通过化学反应连接，便可在外泌体表面连接上带有绿色荧光标记的 RVG 靶向肽，是外泌体表面修饰的卓越改造工具。

 

其他ExoBrooch^®系列产品：

• 靶向结合整合素的iRGD脂锚靶向肽（EA-08-5）
• 靶向结合损伤肾小管中高表达的Kim-1分子的LTH脂锚靶向肽（EA-12-5）
• 靶向结合缺血心肌组织的IMTP脂锚靶向肽（EA-11-5）
• 无靶向肽的对照脂锚（EA-01-1、EA-01-5）

 

二、产品应用

1. 共孵育改造：直接采用共孵育方式连接靶向肽分子，获得具有靶向作用的工程化外泌体。

2. 疾病方向：靶向烟酰乙酰胆碱受体的神经退行性、传染性、炎症、遗传性和肿瘤性等脑部疾病，如神经胶质瘤等脑肿瘤、缺血性脑卒中、重度抑郁、帕金森病、阿尔茨海默病、蛛网膜下腔出血和脑部/胎儿脑部寨卡病毒(ZIKV)感染等，进行功能分子递送的功能机制研究。

 

三、产品规格

EA-06-5，规格 F5000，按5次孵育实验计算外泌体投量达7.3 E+12 Particles。

 

四、产品优势

 

1.简单：简单的共孵育便可实现外泌体表面修饰；

2.方便：无需特殊的仪器或设备；

3.快速：两步操作，动手时间约不超30min；

4.通量大，可一次性获得体内、体外实验所需的靶向外泌体；

5.载量高，293F外泌体上的连接效率＞1nmol/mg外泌体；

6.阳性率高，不同脂锚产品在293F外泌体中的连接阳性率远高于30%；

7.权威高效，类似的post-modification方式有广泛文章应用，有效避免了非永生化细胞转染难、内源改造技术困难多等难题。将外泌体靶向改造变得更精简化、时间和经费及实验流程上更高效化、更快验证靶向肽对目的细胞的靶向性，快速验证快速调整。

 

五、产品组分

 

 

注：该产品不包含外泌体，需自行制备，外泌体建议购买恩泽康泰的工程外泌体货架产品CTE-06或CTE-05，浓度高、纯度高、阳性率高，质控更完善。该产品会赠送密理博的超滤管用于靶向肽连接后外泌体的进一步纯化，所赠为非无菌超滤管（市面没有无菌超滤管），建议超滤产物进行后续实验时，添加抗生素或进一步除菌过滤。

 

六、操作步骤

 

共孵育后一步回收便可完成外泌体靶向修饰。

 

通过荧光定量标准曲线便可快速获得脂锚反应及纯化后外泌体的负载量。

 

七、验证数据：

 

1.外泌体标记

 

1）脂锚标记：293F外泌体(CTE-06）与RVG脂锚（荧光修饰）、Chol脂锚对照， 25 ℃ 4 h，4 ℃ 24 h，孵育后，100 kD超滤管清洗。

2）阳性率检测：标记好的外泌体经纳米流式检测阳性率。

 

2.N2a细胞靶向性检测

 

1）细胞准备：细胞铺板5E4 cells/孔，培养箱预培养24 h，后细胞计数 

2）外泌体与受体细胞共孵育：每组外泌体按照外泌体:cells比例为1000、2500、5000、7500、10000加入外泌体，细胞培养箱孵育2h

 

3.靶向性检测：去除培养基，PBS清洗3次，PBS重悬后进行细胞流式检测

 

 

结果：RVG脂锚修饰的外泌体相对于对照外泌体对N2a细胞有明显靶向差异。

 

 

注：

1.避免反复冻融。

2.非产品质量问题，不接受退换货。

3.验证数据仅供参考，不作为交付标准。