Unizol总RNA提取试剂 Unizol Total RN

Unizol Total RNA Extraction Regent
Unizol总RNA提取试剂

目录号
RE703

产品组成

组分	规格
Unizol Total RNA Extraction Regent	100 mL

保存条件
2~8℃避光保存12个月。

产品简介 
Unizol Total RNA Extraction Regent是基于异硫qing酸胍/酚的广谱型总RNA提取试剂，具有极强的裂解能力，可在短时间内裂解细胞和组织样本，并有效抑制RNase活性，保证RNA的完整性。
本产品适用于次生代谢较少的植物组织（如幼苗、幼叶等）、培养细胞、动物组织、微生物。提取过程可在1 h内完成，提取的总RNA纯度高、完整性好，最大限度的去除了蛋白质和基因组DNA等杂质，可以直接用于RT-PCR、Northern Blot、体外翻译及mRNA纯化等实验。

产品特点

• 适用范围广；
• 操作简单快速，整个过程可在1 h内完成；
• 操作可视，溶液呈粉红色，便于分离水相及有机相。

适用范围
本产品适用于次生代谢较少的植物组织（如幼苗、幼叶等）、培养细胞、动物组织、微生物样品的总RNA提取。

注意事项

1. 本产品含有苯酚等物质，使用时应穿戴防护物品，避免沾染皮肤、眼睛及衣物，防止口鼻吸入。如不慎沾染皮肤或眼睛，立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生帮助。
2. 使用RNase-free的实验器具，包括枪头和离心管，并且RNA实验用的器具需专门使用，不要用于其它实验，避免交叉污染。

使用方法
操作示例
自备试剂：氯仿、异丙醇、75%乙醇（用RNase-free水配制）、RNase-free水

1. 样品准备

1. 动物/植物组织

1. 取新鲜组织立即用液氮速冻，迅速转移至液氮预冷的研钵中充分研磨，期间不断加入液氮，直至研磨成粉末状(无明显可见颗粒)；
2. 将研磨至粉末状的样品转移到离心管中，每50~100 mg样品加入1 mL Unizol Reagent，匀浆处理；
3. 室温静置5 min（使核酸蛋白复合物完全分离）。

注意：样品体积一般不要超过Unizol Regent体积的10%，若取样量过多会导致提取的RNA中有DNA污染。

2. 贴壁细胞

1. 倒出培养液，用1×PBS清洗1次；
2. 每10 cm² 培养面积生长的细胞中加入1 mL Unizol Reagent，轻微晃动，使本产品充分覆盖到细胞表面，使用移液枪反复吹打使细胞裂解；
3. 将含有细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹打直至裂解液中无明显沉淀；
4. 室温静置5 min。

3. 悬浮细胞

1. 将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8,000×g 4℃ 离心2 min收集细胞；
2. 每5×10⁶ ~ 1×10⁷个细胞加入1 mL Unizol Reagent，用移液枪反复吹打直至裂解液中无明显沉淀；
3. 室温静置5 min。

4. 血液

1. 直接取新鲜的血液，加入3倍体积的Unizol Reagent（推荐0.2 mL全血加入0.6 mL Unizol Reagent），充分振荡混匀；
2. 室温静置5 min。

注意：样品经Unizol Reagent匀浆后，可在-80℃保存至少一个月。

50. 可选步骤：对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品，如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎，可以在匀浆处理后12,000×g 4℃ 离心10 min以除去不溶物质，取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。

2. 向上述裂解液中加入1/5 Unizol Regent体积的氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15 s（彻底混合有利于后续的相分离），溶液呈乳浊状，室温静置5 min；
3. 12,000×g 4℃ 离心15 min。此时样品分为3层，即上层无色的水相（含RNA）、中间层和下层粉红色的有机相。小心吸取上层水相（水相体积约占 Unizol Reagent体积的60%，建议吸取500 μL左右，避免吸取到中间层导致基因组DNA的污染）转移至新的离心管中；
4. 加入等体积的异丙醇，上下颠倒混匀，室温放置10 min；
5. 12,000×g 4℃ 离心10 min，去上清，此时管底会出现白色胶状沉淀；
6. 加入1 mL 75%乙醇（用RNase-free水配制）洗涤沉淀。7,500×g 4℃ 离心5 min，弃去上清；
7. 重复步骤6；
8. 室温晾干5~10 min。加入适量的 RNase-free 水溶解沉淀，必要时可用移液器轻轻吹打或在

55 ~60℃孵育5~10 min，待沉淀完全溶解后将所得到的RNA溶液置于-80°C保存或用于后续试验。
注意：不能使用真空离心机或加热的方法干燥RNA，过分干燥会使RNA难以溶解，导致OD260/OD280值偏低。

常见问题与解决办法
Q1：RNA降解？
A1：

1. 样品处理或保存不当。尽量使用新鲜样品，取样后立即液氮速冻置于-80℃冰箱保存，尽快使用；
2. 样品过量。请参考说明书推荐取样量；
3. 环境、试剂或耗材中含有RNase。使用RNase-free的试剂及耗材，建议在通风橱中操作。

Q2：RNA得率较低？
A2：

1. 样品研磨或裂解不充分。建议参考说明书充分研磨、振荡样品，使样品充分裂解；
2. 取样量较少。适当增加样品量；
3. RNA沉淀未完全溶解。RNA不能过分干燥，必要时用移液器轻轻吹打或在55 ~ 60℃孵育5 ~ 10 min。