Rat IL-18 ELISA Kit

碧云天的RatIL-18ELISA Kit (RatIL-18Enzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即大鼠白细胞介素18酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-18的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为58pg/ml，与人IL-18、大鼠IL-12等没有交叉反应，与小鼠的IL-18有16.6%交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。

白细胞介素18 (Interleukin-18, IL-18)，又称为IFN-γ诱导因子(Interferon-gamma-Inducing Factor, IGIF)，是一种分子量为18kDa的细胞因子，与IL-12具有相似的生物学功能，与IL-1家族蛋白在结构上具有一定的相似性。IL-18首先合成得到一个分子量为24kDa、不包含信号肽的前体蛋白分子，随后在酶切作用下得到活化的IL-18。IL-1转化酶(interleukin-1 converting enzyme/ICE, caspase-1)作用于IL-18前体分子中P1位置的天冬氨酸残基，产生成熟的具有生物活性的多肽。能够产生IL-18的细胞包括Kupffer细胞、活化的巨噬细胞、角质细胞、小肠上皮细胞、成骨细胞、肾上腺皮质细胞等。

IL-18主要作用于Th1型细胞，与IL-12一起诱导IFN-γ的产生。除了能够诱导IFN-γ的产生外，IL-18还能够刺激外周血单核细胞产生GM-CSF，增加Th1型细胞表面Fas配体的表达，刺激Th1型细胞因子的产生。IL-18还是激活Th1细胞的共刺激分子，另外IL-18还能够诱导活化的B细胞产生IFN-γ，抑制B细胞IgE产生。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中大鼠IL-18的浓度，其原理见图1。大鼠IL-18特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的大鼠IL-18会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗大鼠IL-18抗体后，生物素化抗大鼠IL-18抗体与大鼠IL-18结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。大鼠IL-18浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PI555-1	大鼠IL-18抗体预包被板	8孔×12条
PI555-2	样本分析缓冲液	5ml
PI555-3	标准品稀释液	10ml
PI555-4	大鼠IL-18标准品	2-4瓶
PI555-5	大鼠IL-18生物素化抗体	10ml
PI555-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PI555-7	洗涤液(20X)	30ml
PI555-8	TMB溶液	10ml
PI555-9	终止液	5ml
PI555-10	封板膜(透明)	2张
PI555-11	封板膜(白色)	2张
—	说明书	1份

保存条件：

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

注意事项：

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。