Mouse NGAL/Lipocalin-2 ELISA K

碧云天的Mouse NGAL/Lipocalin-2 ELISA Kit (Mouse Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin/Lipocalin-2 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的NGAL的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为7.9pg/ml，与人Lipocalin-2、Lipocalin-1及大鼠的Lipocalin-2等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin, NGAL)，又称脂质运载蛋白2 (Lipocalin-2)，是一种分子量为25kDa的糖蛋白，属于Lipocalin家族，同时也是嗜中性粒细胞颗粒的组成部分。在炎症期间，NGAL主要由巨噬细胞、胶质细胞和上皮细胞合成。NGAL能够参与固有免疫应答、细胞分化、肿瘤生成和细胞存活等多种过程。NGAL能以单体形式、同源二聚体形式存在，也能够与MMP-9组成异质二聚体。成熟的小鼠NGAL与人的和大鼠的NGAL分别有62%和81%的同源性[1]。

NGAL能够与细菌分泌出的儿茶酚胺铁载体结合，抑制细菌铁离子吸收，因此在固有免疫中NGAL能够作为抑菌剂发挥作用。TLR4激活会诱导免疫细胞和上皮细胞产生NGAL。部分细菌通过产生修饰后的铁载体使得NGAL无法与之结合，从而逃避免疫清除。哺乳动物细胞经由NGAL介导的铁离子的吸收对于一些铁离子敏感基因的转录调控具有重要影响。在肾脏中，NGAL介导的铁离子运输对于保护肾脏免受损伤十分必要[2]。

在一些非细菌性炎症中，NGAL的表达也会有所增加，例如牛皮癣、溃疡性结肠炎和肥胖脂肪组织中。NGAL还能够促进肝细胞的胰岛素抵抗[3]。此外，在贫血和缺氧条件下，NGAL表达也会上调，其能够抑制红细胞的分化过程。在一些肿瘤病灶或肿瘤相关基质中，NGAL表达也会上调，但是其对肿瘤的具体作用取决于具体的肿瘤类型和所处的微环境状态。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠NGAL/Lipocalin-2的浓度，其原理见图1。小鼠NGAL/Lipocalin-2特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠NGAL/Lipocalin-2会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠NGAL/Lipocalin-2抗体后，生物素化抗小鼠NGAL/Lipocalin-2抗体与小鼠NGAL/Lipocalin-2结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠NGAL/Lipocalin-2浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PN757-1	小鼠NGAL/Lipocalin-2抗体预包被板	8孔×12条
PN757-2	标准品稀释液(5X)	60ml
PN757-3	小鼠NGAL/Lipocalin-2标准品	2-4瓶
PN757-4	小鼠NGAL/Lipocalin-2生物素化抗体	10ml
PN757-5	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PN757-6	洗涤液(20X)	30ml
PN757-7	TMB溶液	10ml
PN757-8	终止液	5ml
PN757-9	封板膜(透明)	2张
PN757-10	封板膜(白色)	2张
—	说明书	1份

保存条件：

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

注意事项：

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。