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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
99
- 生长状态:
贴壁生长
- 运输方式:
常温/干冰
- 细胞形态:
上皮细胞样,多角形
- 物种来源:
小鼠
- 规格:
1×10⁶cells
MOVAS 小鼠主动脉血管平滑肌细胞
产品编号:CL-116m
一、细胞简介
1999年12月通过胶原酶-弹性蛋白酶消化分离的原代血管主动脉平滑肌细胞用编码SV40大T抗原以及新霉素抗性基因的逆转录病毒转导。在 0.4 mg/ml G418 存在下选择克隆并通过有限稀释进行亚克隆。来源ATCC(CRL-2797)。
二、细胞特性
来源:C57BL/6小鼠 心; 主动脉;平滑肌
形态:上皮细胞样,多角形,贴壁生长
培养条件:气相:5%CO₂+95%AIR;温度:37℃;培养箱湿度:70%-80%
含量:>1x10⁶cells
规格:T25瓶x1(常温运输)/2mL冻存管x2(干冰运输)
用途:本产品仅供实验室研究使用,不可用于动物或人类治疗或诊断用途
三、完全培养基配制
该细胞完全培养基为:
89%DMEM基础培养基 + 10%优质胎牛血清 + 1%双抗 + G-418(0.2mg/mL)
四、细胞接收注意事项
收货当天发现异常,请在24小时内及时联系客服,逾期视为收货良好!
冻存管形式:收货后及时置于-80℃冰箱保存,若长时间不使用,应过夜转移至液氮。
T25瓶形式:收货后于培养箱中静置2-3h,再对细胞进行常规操作。请严格按照本说明操作,否则造成细胞失活等情形,不予提供补发服务。
对于贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中静置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度在60%以下,去除培养瓶中旧培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养;若细胞生长密度达到70%-80%或以上,可对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
注意:运输用的灌液培养基不能再用来培养细胞,请换用按照说明书要求配制的新鲜完全培养基。收到细胞后第一次传代建议使用T25培养瓶1:2传代。
细胞复苏、传代、冻存操作
(一)冻存细胞复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀,1000rpm离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
注意:建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩,避免冻存管因温差变化发生爆炸造成人员伤害。
(二)细胞传代
细胞密度达到80%-90%时,即可进行传代,步骤如下:
① 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
② 加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2min(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化。
③ 轻轻打匀后吸出,1000rpm离心3-5min,弃去上清液,补加1~2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2比例分到2个新的培养瓶中,添加6~8mL完全培养基,置于细胞培养箱中培养。后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
(三)细胞冻存
收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。步骤如下:
① 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。
② 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用细胞冻存液(90%FBS+10%DMSO)重悬细胞,按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中,标注好名称、代 数、日期等信息。
③ 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全柜内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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