NCI-H526 人小细胞肺癌

细胞介绍

该细胞来源于白种人性别：男，55岁，转移部位：骨髓 疾病：E期，癌；变异性小细胞肺癌 。

细胞特性

来源：肺组织

形态：上皮样，悬浮圆形团簇，悬浮生长

含量：>1x10⁶cells

规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

用途：仅供科研使用

细胞运输、保存及注意事项

	复苏细胞	冻存细胞
包装	充液的T25细胞培养瓶	1mL冻存管
运输条件	常温	干冰
保存方式	75%酒精消毒瓶壁，置于37℃恒温细胞培养箱	-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮/立即复苏
注意事项	①　收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们； ②　请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照，10X和20X各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据； ③　悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）； ④　运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。 注意：该细胞为悬浮细胞，请注意离心收集，请勿直接倒掉细胞培养液。

培养基及培养冻存条件准备：

完全培养基	RPMI-1640培养基 + 优质胎牛血清，10%
培养条件	气相：空气，95%；二氧化碳，5%；温度：37℃；培养箱湿度为70%-80%
冻存液	无血清细胞冻存液（如：冻一支，加入 1ml 无血清冻存液即可）

细胞复苏、传代、冻存操作

（一）冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4~6mL完全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm/min离心3~5min，弃去上清液。加入1mL完全培养基重悬细胞后，均匀铺于含6~8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中，置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况。

注意：建议复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸造成人员伤害。

（二）细胞传代（建议以同等底面积的培养瓶/皿按照1：2比例传代）

①　待细胞密度达到80%~90%时，即可进行传代培养。

②　悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×10⁵~1×10⁶个/mL（不同细胞对密度要求不同）可以维持细胞的正常生长。

③　如需分瓶可以将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min离心5min，弃去上清液。向细胞沉淀中加入1~2mL完全培养基重悬混匀细胞，将细胞悬液按1：1比例均匀铺于2个新的培养瓶/皿中，添加6~8mL完全培养基，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

④ 也可选用半换液方式，将 T25 瓶子竖起来，轻轻拍打两下，在培养箱静置 10 分钟，肉眼可见大部分细胞沉在底部，轻轻吸去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按 1： 2 比例分瓶，补充新的完全培养基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。

（三）细胞冻存

①　细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度，一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml。

②　1000rpm离心3-5min，去掉上清，用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

③　将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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