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南京信帆生物技术有限公司
动物全血和血浆可选用肝素钠,EDTA-K2,枸缘酸钠,柠檬酸钠抗凝。需要了解该产品的详细信息可以咨询我司销售人员。
血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等,其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种,是细胞合成蛋白质的基本成分,其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成,一定要由培养液提供。
血清在动物细胞培养中的作用:
1.提供细胞生存和增殖所bi需的生长调节因子。
2.补充基础培养基中没有或量不足的营养成分。
3.含有一些可供贴壁细胞型细胞贴壁生长的基质成分。
4.提供载体蛋白,可结合维生素、脂质、金属离子 等。
5.在一些情况下,中和毒性物质保护细胞不受伤害。
6.给培养液提供良好的缓中系统。
7.提供蛋白酶抑制剂,保护细胞免受死细胞释放的蛋白酶的伤害。
血清的使用注意事项:
1.解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法( -20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。
2.解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
3.请勿将血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,从而影响血清质量。
4.血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多, 若非必要,可无须做此步骤,若定要做 血清的热灭活,请严格遵守56°C,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀, 都会造成沉淀物的增多。
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文献和实验加入适量红细胞裂解液裂解红细胞(可加入 500 μL 1× 红细胞裂解液重悬细胞,室温裂解 2 min 后,立马加入 10 mL PBS,300 g 离心 5 min 后弃上清)。 若提取的腹腔巨噬细胞需培养,请注意无菌操作。 收集腹水时,从小鼠左侧(肠道较多)注射 PBS,从右侧(器脏较大)抽腹腔灌洗液,注意不要扎到器脏。 小鼠腹腔灌洗液收集细胞比较脆弱,加细胞染色缓冲液有利于细胞的保存,但建议当天及时检测。 小鼠腹腔灌洗液中大多数为巨噬细胞,巨噬细胞检测需要封闭Fc受体,此时可使用小鼠 CD16/32纯
。 加入2 mL 1×红细胞裂解液重悬细胞,室温裂解2~3 min后,立马加入10 mL PBS,300 g离心5 min,弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬脾脏细胞,将细胞悬液用200目筛网再次过滤后计数, 并调整细胞浓度至1×107/mL。 b) 吹打法 小鼠颈椎脱臼处死,置于75%乙醇浸泡5 min后,取出小鼠,置于无菌操作台上,左腹侧朝上。 小鼠左腹侧中部剪开小口,撕开皮肤,暴露腹壁,可见红色长条状脾脏。 脾脏下侧提起腹膜,剪开后上翻,暴露出脾脏,用镊子提起脾脏,眼科剪分离脾脏下面
),剪去两端软骨,露出红色的骨髓腔。注意在该过程中应保留尽可能多的骨髓腔。 拿一支1 mL的无菌注射器,吸取1 mL PBS,轻轻插入骨髓腔,冲洗骨髓腔以获得骨髓。重复2~3次,可冲出绝大部分细胞。冲洗完后,用移液器轻轻吹打细胞,将细胞团吹散。 将冲洗液用200目的滤网过滤,滤液收集于15 mL离心管中,300 g离心5 min,弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬细胞,细胞计数,并调整细胞浓度至1×107/mL。 注意事项: 骨髓样本细胞分群明显,可以裂解红细胞,也可不裂解。如需裂解红细胞,可以加入
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