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- 2025年07月14日
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北京云肽生物科技有限公司
Qiagen12391无内毒素宏量质粒提取试剂盒
Qiagen12391无内毒素宏量质粒提取试剂盒产品简介：产品品牌：QIAGEN
产品名称：无内毒素宏量质粒提取试剂盒
产品货号： 12391产品规格：5T
Qiagen12391无内毒素宏量质粒提取试剂盒产品说明：
纯化得到至多10 mg的无内毒素高转染级纯质粒或柯斯质粒DNA
- 纯化得到的DNA内毒素水平低于0.1 EU/µg
- 纯化流程快，同时去除内毒素
- 获得高产量、高拷贝质粒DNA
- 使用LyseBlue，获得最佳的裂解和高产量的DNA
Performance
EndoFree Plasmid Kit将高效的内毒素去除步骤整合到质粒纯化流程中，不需要额外步骤，也不需用亲和柱去除脂多糖。通过QIAfilter Mega-Giga Cartridge过滤细菌裂解液，并使用重力流QIAGEN-tip阴离子交换柱纯化质粒DNA。产量可达10 mg（Giga）、2.5 mg（Mega）、500 μg（Maxi）DNA。纯化的DNA无内毒素（<0.1 EU/µg DNA）。
选用EndoFree Plasmid Mega Kit而非EndoFree Plasmid Giga Kit纯化低拷贝质粒和科斯质粒，将会得到更好的效果，因为后者需要较大的培养体积，而QIAfilter Mega-Giga Cartridge的容量有限。
EndoFree Plasmid Kits去除细菌在裂解过程中释放的内毒素，内毒素会影响原代细胞和敏感培养细胞的DNA转染。从EndoFree Plasmid Kits得到的无内毒素DNA高度适用于可重复且结果可靠的转染（参见"Plasmid purification method versus transfection efficiency"和"Plasmid purity versus transfection efficiency"及表"Endotoxin levels in plasmid preparations"和"EndoFree DNA yields high transfection efficiencies with primary cells"）。QIAGEN超纯无内毒素DNA也适用于基因治疗研究和其他敏感应用。
| * 宿主菌：大肠杆菌DH5α 质粒：pRSVcat。 † 1 ng LPS = 1.8 EU。 ‡ 根据表中数据计算 。 |
||
| 质粒制备中的内毒素水平* 质粒制备方法 |
内毒素（EU†/µg DNA） | 平均转染效率‡ |
| EndoFree Plasmid Kit | 0.1 | 154% |
| QIAGEN Plasmid Kit | 9.3 | 100% |
| 2x CsCl | 2.6 | 99% |
| Silica-gel slurry | 1230.0 | 24% |
| * 原代兔胃壁细胞转染pEGFP-N2（CLONTECH），pEGFP-N2由所示的方法制备。使用Effectene Transfection Reagent进行转染。该数据是细胞表达GFP的百分率，由转染48小时后绿色荧光细胞数量确定。转染效率是每种纯化方法制备的超过2个不同的DNA中6–9个复制样本的平均值。（数据由C. Chew and J. Parente提供，Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.） | |
| 无内毒素DNA转染原代细胞的高转染率* DNA纯化方法 |
转染细胞比例 |
| EndoFree Plasmid Kit | 21.0% ± 0.93 |
| QIAGEN Plasmid Kit | 8.1% ± 0.57 |
| Silica-gel slurry | 5.2% ± 0.74 |
纯化的质粒DNA内毒素污染水平取决于所用的纯化方法（参见"Endotoxin levels in plasmid preparations"）。硅胶技术纯化的DNA具有非常高的内毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和两次CsCl超速离心可获得相对低水平内毒素的纯DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的内毒素去除步骤，获得<0.1 EU/µg的质粒DNA。
QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊设计的过滤装置，用于代替细菌细胞碱裂解后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可完全去除SDS沉淀，清除细菌裂解液，相比离心可大量节约时间，减少1小时的质粒纯化时间。QIAfilter Mega-Giga Cartridges采用内部真空方式轻松高效的清除大量细菌裂解液（注意：该试剂盒不包含瓶子）。
QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）为核酸纯化而开发。它较好的分离性能使得DNA纯度与连续两次CsCl梯度离心获得的DNA纯度相当。由重力流驱动并持续运转的预装QIAGEN-tips，较大限度减少手动制备质粒所需的时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用有毒物质，如苯酚，氯仿，溴化乙锭和CsCl，最大限度地减少对用户和环境的危害。
内毒素，又称脂多糖或LPS，是大肠杆菌等革兰氏阴性菌细胞膜的组成部分，如大肠杆菌（参见"Bacterial cell wall"）。内毒素在质粒裂解纯化过程中释放出来，并显著降低内毒素敏感细胞株的转染效率。此外，内毒素与DNA竞争“自由”转染试剂，影响转染实验中质粒DNA的摄取。内毒素也诱导巨噬细胞和B细胞等免疫细胞发生非特异性免疫反应，从而导致转染结果的误读。这些反应包括诱导的蛋白质和脂类，如IL-1和前列腺素等的合成。总体而言，内毒素在转染实验中是不可控变量，影响结果的可重复性，使它们难以对比、解读。在基因治疗研究中，内毒素可造成内毒素休克综合症和激活补体级联，干扰研究。
Procedure
在碱性条件下，细菌细胞裂解，使用QIAfilter Mega-Giga Cartridge清除粗裂解物。将Endotoxin Removal Buffer加入到过滤后的裂解液中。冰浴后，将纯净的裂解物上样到阴离子交换柱上，在适当的低盐和pH条件下，质粒DNA选择性结合。用中盐缓冲液清除RNA、蛋白质、代谢产物和其他低分子量杂质，超纯质粒DNA被高盐缓冲液洗脱（参见"QIAGEN Plasmid Kit procedures"）。而后DNA由异丙醇脱盐、沉淀并且离心回收。
Applications
使用EndoFree Plasmid Kits纯化的DNA适合多种敏感应用，包括：
- 转染，包括原代、敏感以及悬浮细胞
- 基因治疗研究
- 基因沉默
- 显微注射
温馨提示：不可用于临床治疗。
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文献和实验相关实验
，不能得到足够的菌量来抽提质粒，摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型，导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多：容易导致裂解不充分，且容易超过硅胶膜柱的承载上限，最终使得质粒提取效率降低，建议参考提取试剂盒建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当：比如在加入缓冲液重悬菌体时，菌体没有充分分散悬浮，导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解，可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂（QIAGEN 质粒提取试剂盒中均有配备 LyseBlue 指示剂），均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用
pl198242：请问各位大侠：用质粒提取试剂盒从大肠杆菌中提取质粒后，想用于细胞转染，还需要另外的操作来除菌么？ 另外是否还需要纯化？丁香园网友boboyuan认为：不需要，当然，前提是你提取质粒时操作是规范的。提完的质粒放－4度保存，转染的时候直接用就行了。丁香园网友hzh_0796认为：看你是用什么方法提得，纯度如何我用小提的时候发现，最后一步用洗脱液洗时将吸附柱放进一个新的EP管时盖子居然盖不上，硬着头皮这样拿去离心，自己都不放心用。后面测了下浓度好低，只有89微克每毫升。看来小提
程度等等。 现在大部分质粒提取都用试剂盒， 根据实验需要我们可以选择不同级别的产品： 1. 从纯度上看：常规操作（如酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化），普通纯度的质粒即可；对于转染实验，则需要无内毒素质粒提取试剂盒。 2. 从提取量上看：1-20μg，小量提取试剂盒；20-40μg，中量提取试剂盒；大于40μg，大量提取试剂盒。 3. 宿主菌类别上：主要分为普通细菌质粒提取试剂盒，真菌质粒提取试剂盒，酵母菌质粒提取试剂盒。 举例：SunShinecleanTM无内毒素质粒小量抽提试剂盒采用新型
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