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免疫组化、免疫荧光、染色、切片
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北京永欣康泰科技发展有限公司
免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)是指用免疫学原理,通过特异的抗原-抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。此方法可以识别定位各种细胞组织成分,如蛋白质、多肽、核酸、部分类脂、多糖、激素、病原体(寄生虫、细菌、病毒)、受体、神经介质、肿瘤的标记物(抗原或相关抗原)等,一般认为凡具有抗原性或半抗原性物质都可以用免疫化学的方法检查并显示出来。可以在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察其性质定位,还可以利用细胞分光光度计、图像分析仪、共聚焦显微镜等进行细胞原位定量测定。
免疫组化实验步骤:
石蜡组织包埋:
组织固定、组织脱水、组织透明、组织浸蜡、组织包埋、石蜡切片、HE染色、脱蜡水合、蒸馏水稍洗、脱水封片
冰冻切片:
冰冻包埋、冰冻HE、其余同石蜡切片
免疫荧光实验步骤:
| 细胞样品准备 | 细胞直接接种在孔板,chamber slides或者盖玻片上,用预热的PBS洗3次,将PBS 吸出。 |
| 冰冻 切片 |
最好用新鲜包埋块现用现切的冰冻切片,短时间可保存于-80度冰箱。 |
| 固定 | 3%PFA 固定15min;1×PBS 洗3次 |
| 打孔 破膜 |
0.5%—1% Triton X-100/PBS 室温打孔30min 1×PBS 洗3次 |
| 封闭 | 用5%-10% 的二抗动物血清或者3%BSA 室温封闭1-2h |
| 孵育 一抗 |
去掉封闭剂后,加入一抗4度冰箱过夜 1×PBS 洗3次 |
| 孵育 二抗 |
用1×PBS稀释二抗(1:200),室温孵育45min 1×PBS 洗3次 |
| 染核 | 用PI/Hochest 室温染核10min 1×PBS 洗3次 |
| 封片 | 用封片剂小心封片后将片子置于暗盒内4度保存(可于-20度长期保存) |
病理实验室目前拥有德国产徕卡全自动脱水机(ASP200)、包埋机(EG1150)、石蜡切片机(RM2255)等设备来保证以下业务的开展。
主要服务项目:
1 、常规HE染色、特殊染色,有10余种特染检查,如网状纤维染色、Masson染色、弹力纤维、胶原纤维染色等。
2 、免疫组织化学检查:有80余种免疫组化检查项目,淋巴瘤系列标记抗体、激素受体、细胞增殖性标记物、癌基因蛋白等。
实验室可构建的动物模型 :
| 构建动物模型名称 | 适用范围 |
| 1、裸鼠肿瘤(皮下、原位)动物实验 | 胰腺、肝、胃原位接种、皮下接种 |
| 2、兔 腹主动脉、颈动脉硬化(球囊法)模型 | 稳定制备 颈动脉、腹主动脉硬化模型 |
| 3、心肌缺血、大、小鼠、兔、小型猪心电图、心脏超声、病理评价 | 心肌缺血及再灌注、心梗、血压测定(麻醉及清醒状态下)等 |
| 4、Ⅰ、Ⅱ型糖尿病大小鼠、兔动物模型 | 高脂诱导+STZ制备糖尿病模型及糖尿病并发症研究,药效评价 |
| 5、骨质疏松大鼠、小鼠实验(去势) | 老年性骨质疏松相关疾病临床前药效评价 |
| 6、股骨头坏死、骨缺损、鼠、兔模型 | 镇静、镇痛动物模型,行为学模型制作及药物筛选 |
| 7、Apoe小鼠动脉粥样硬化整体实验 | 高脂饲养、取材、病理实验、大体染色等 |
| 8、急性粒细胞白血病动物实验 | |
| 9、肾结石快速成模大鼠模型 | 乙二醇致大鼠肾脏草酸钙结石模型 |
| 10、眼科大小鼠模型、视网膜铺片、 玻璃体腔内注射 |
眼科疾病模型及相关检测方法 |
| 11、脑缺血、帕金森、脑出血动物模型 | 脑病实验、颅内注射、技术成熟稳定 |
| 12、肾脏缺血、肾移植、肾衰动物模型 | 肾脏缺血、肾移植、肾衰竭实验及检测平台 |
检测平台
| 服务项目 | 服务承诺 | 服务周期 | 样本种类 |
| 病理切片、免疫组化 | 染色结果照片 | 2-3周 | 组织 |
| Western blotting | 胶片 | 1-2周 | 蛋白样本或组织 |
| 流式细胞服务 | 散点图、分析数据、设备信息等 | 1-2周 | 血样、骨髓等 |
| 细胞凋亡检测 | 凋亡图、数据分析 | 细胞 | |
| RT-PCR | 扩增图 | 1-2周 | RNA或组织 |
| 血压监测(无创式) | 实时血压数据 | 大、小鼠 |
备注:以上只是常规制备的动物模型种类,如果有其他动物模型制备的需求,也可以按照方案进行定制
永欣康泰坚持:
上门取样、客服专人跟进项目进度、随时汇报实验进展、为您有效降低科研成本、缩短实验周期。
<-----扫码关注我们秉承工匠精神 保持严谨态度、专业技术
拓宽思路和眼界 积极探索新的模型构建方法
不断积累经验 完成客户的每一项托付
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文献和实验脱蜡和水化 将切片依次浸入二甲苯Ⅰ10 min,二甲苯Ⅱ(10 min)。 再次浸入无水乙醇Ⅰ(5 min)-无水乙醇Ⅱ(5 min)-95%酒精(5 min)-80%酒精(5 min)-70%酒精(5 min),然后去离子水冲洗2次,每次2 min。 抗原修复 (可选) 将组织切片放入修复盒,然后加入适量 0.01M 枸橼酸缓冲液(pH 6.0)或 EDTA 修复液(pH 9.0),液面要浸没组织。 微波中档修复 10 min(液体沸腾时开始计时),此过程中勿使组织干片
1.取材组织块,经固定后,常规石蜡包埋,4μm切片。 2.切片常规用二甲苯脱蜡,经各级乙醇至水洗:二甲苯(I)5min→二甲苯(Ⅱ)5min→100%乙醇2min→95%的乙醇1min→80%乙醇1min→75%乙醇1min→蒸馏水洗2min。 3.苏木素染色5min,自来水冲洗。 4.盐酸乙醇分化30s(提插数下)。 5.自来水浸泡15min或温水(约50℃)5min
液固定的材料,染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色细胞核被苏木素染成蓝紫色,细胞质被伊红染色呈粉红色。 实验用品 1、实验器材:恒温箱、切片机、解剖器械、载玻片、酒精灯、染色缸和烧杯等。 2、实验 试剂 : Carnoy固定液;二甲苯;各级浓度的酒精溶液;Ehrlich苏木精染液;伊红染液 3、实验材料:小鼠小肠或肝组织 方法与步骤 石蜡切片样本的制作










