肉桂酸-4-羟化酶（C4H）测试盒_分光光度法(稳定高效灵敏

中文名称：肉桂酸-4-羟化酶（C4H）测试盒
测定方法：分光光度法
测定规格：50管/48样
保存条件：低温避光保存

测定意义：
C4H 又称反式肉桂酸-4-单氧化酶，多存在于高等植物、酵母、菌类中，该酶催化肉桂酸羟
化作用产生4-香豆酸盐，是苯丙烷途径中继L-苯丙氨酸解氨酶之后的第二个关键酶。



测定原理：
C4H 催化肉桂酸和NADP 生成4-香豆酸盐和NADPH，在340nm 下测定NADPH 生成速率，
即可反映C4H 活性。

需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提
取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次 ）；
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，
加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1）取试剂二一瓶，加入25mL 试剂一充分溶解混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其
它物种）水浴5min；现配现用（配后 24h 内用完）；
（2）在1mL 石英比色皿中加入50μL 样本和950μL 试剂二，混匀，立即记录340nm 处初
始吸光值A1 和 5min 后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

注 意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定