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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温保存
- 保质期:
6个月
- 英文名:
GPb测试盒
- 库存:
796
- 供应商:
江西江蓝纯生物有限公司
- 规格:
50管/24样
测定方法:分光光度法
测定规格:50管/24样
保存条件:低温避光保存
测定意义:
糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代谢的关键酶,使糖原分子从非还原端逐个断开α-1,4-糖苷键移去葡萄糖基,释放1-磷酸葡萄糖,直至临近糖原分子α-1,6-糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和无活性的糖原磷酸化酶b(GPb)两种形式。GPb在一定浓度的腺苷酸(5,-AMP)存在下可被激活。
测定原理:
GP催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH,在340nm下测定NADPH上升速率,即可反映GP活性。添加一定浓度的腺苷酸(5,-AMP)时测定GP(GPa和GPb)活性,未添加腺苷酸(5,-AMP)时测定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零;
2、工作液的配制:临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
3、试剂三的配制:临用前在试剂三瓶中加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
4、试剂四的配制:临用前在试剂四瓶中加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
5、试剂五的配制:临用前在试剂五管中加入1.25mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
6、将工作液、试剂三、试剂四和试剂五置于37℃预热5分钟;
7、1mL石英比色皿中加入50μL样本、50μL试剂三、50μL试剂四、50μL蒸馏水和800μL工作液,立即混匀,记录340nm处5min后的A1和10min后的吸光值A2,计算ΔAGPa=A2-A1。
8、在1mL石英比色皿中加入50μL样本、50μL试剂三、50μL试剂四、50μL试剂五和800μL工作液,立即混匀,记录340nm处5min后的A3和10min后的吸光值A4,计算ΔAGP=A4-A3。
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
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文献和实验真香!用 qPCR 做外泌体研究,南京医科大学拿下 41 分 SCI
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