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- gelatins
- 国内
- JCsw_1178
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温保存
- 保质期：
6个月
- 英文名：
蛋白质羰基含量测试盒
- 库存：
168
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 规格：
100T/48S
注 意 ：正式实验之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。
自备实验用品及仪器：
天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、无水乙醇、乙酸乙酯。
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂0.1g×5支，4℃避光保存。（使用前根据样品数，每支加1mL水溶解，每支为10个样品用量）
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。
试剂六：液体60mL×1瓶，4℃保存。
样品处理：
1.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，于4℃，4000g离心10min，取上清，加入0.1mL试剂一，室温放置10min，4℃，10000g离心10min，取上清待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体样本：直接测定。
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文献和实验漏斗冲入100mL 容量瓶中，加水达70-80mL，摇匀后置于80℃恒温水浴上浸提0.5h。 待上述样品冷却后，沉淀蛋白质，加入5%硫酸锌5mL，再慢慢滴入0.3mol/L Ba(OH)2 5mL，以沉淀蛋白质。振荡后静置，至上层出现清液后再加一滴Ba(OH)2,直至无白色沉淀时，向容量瓶加水至刻度。 3.还原糖含量的测定： 过滤上述已定容的样品液，取5mL 滤液，再定容到100mL（此步视样品的含糖量而定）。取已稀释的溶液2mL，与标准葡萄糖显色法相同：加铜试剂2mL，煮沸10min，加砷钼
蛋白质二级结构（secondary structure）(图)
二级结构是指多肽链借助于氢键沿一维方向排列成具有周期性的结构的构象，是多肽链局部的空间结构（构象），主要有α－螺旋、β－折叠、β－转角等几种形式，它们是构成蛋白质高级结构的基本要素。 α－螺旋(α－helix)是蛋白质中最常见最典型含量最丰富的二级结构元件.在α螺旋中，每 个螺旋周期包含 3.6 个氨基酸残基，残基侧链伸向外侧，同一肽链上的每个残基的酰胺氢原子和位于它后面的第4个残基上的羰基氧原子之间形成氢键。这种氢键大致与螺旋轴平行。一条多肽链呈α-螺旋构象
反应,放大自由基的作用,最终发生PUFA间分子重排、交联。由于PUFA主要存在于细胞膜磷脂中,故脂质过氧化反应主要损伤生物膜,引起膜通透性和硬度增加,细胞内环境稳定性改变。 3.2 自由基与蛋白质损伤:生物体内的自由基与蛋白质发生过氧化反应,能引起蛋白质分子交联。Stadt man ER等[4,7]研究发现衰老细胞内的羰基含量增多,细胞内的氧化蛋白(羟基化蛋白)增加,最终氧化蛋白质积聚、沉积,使重要功能蛋白质如酶失活;此外,脂质过氧化的分解产物醛类(主要是烯醛)也能与蛋白质的氨基(NH2)反应使蛋白质
