磷脂酶D(PLD)科研专用测试盒/可见分光光度法

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
磷脂酶D（EC3.1.4.4）即磷脂酰胆碱水解酶，是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称，广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中，具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。

测定原理：
磷脂酶D催化水解磷脂酰胆碱末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和胆碱，胆碱在胆碱氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢，过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将4-氨基安替比林和重蒸酚氧化成粉红色物质，在500nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅，无水乙醇。

试剂组成和配制：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体55mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加3mL无水乙醇充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：液体35mL×1瓶，4℃避光保存。
标准品：液体1mL×1支，4℃避光保存。



酶液提取：
1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。
血清：直接测定。