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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海晶抗生物工程有限公司
- 库存:
378
- 样本:
来电咨询
- 标记物:
详见说明书
- 适应物种:
来电咨询
- 应用:
仅供科研研究使用
- 检测方法:
微量法
- 检测范围:
1mg/g
纤维素含量(CLL)测试盒_微量法
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
储存条件:低温保存
注 意 :正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖,通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起,是植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维,是自然界中分布广、含量多的一种多糖。
测定原理:
纤维素为β-葡萄糖残基组成的多糖,在酸性条件下加热能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在强酸作用下,可脱水生成β-糠醛类化合物。β-糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合,生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80%乙醇、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体100mL× 1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体10mL× 1支,4℃保存。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至620nm,蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至95度。
3、工作液的配制:在试剂二中加入4mL试剂三,充分溶解,如较难溶解,可加热搅拌;用不完的试剂4℃保存一周;
4、加样表(在EP管中反应):
| 试剂(μL) | 空白管 | 测定管 |
| 样本 | 150 | |
| 蒸馏水 | 150 | |
| 工作液 | 35 | 35 |
| 浓硫酸 | 315 | 315 |
注意:
1、空白管只要做一管。
2、由于浓硫酸具有强腐蚀性,请谨慎操作。
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文献和实验度值A595为纵座标,作图,即得到一条标准曲线。由此标准曲线,根据测出的未知样品的A595值,即可查出未知样品的蛋白质含量。 0.5mg牛血清蛋白/ml溶液的A595约为0.50。 2.微量法 当样品中蛋白质浓度较稀时(10-100mg/ml),可将取样量(包括补加的水)加大到0.5ml或1.0ml,空白对照则分别为0.5ml或1.0ml H2O,考马斯亮蓝G-250试剂仍加5.0ml,同时作相应的标准曲线,测定595nm的光吸收值。 0.05mg牛血清蛋白/ml溶液的A595约为0.29。 六
0 0.08 0.06 0.04 考马斯亮蓝 g-250试剂5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 每管中的蛋 白质量(mg) 光吸收值 (a595) (3)用标准蛋白质量(mg)为横座标,用吸光度值a595为纵座标,作图,即得到一条标准曲线。由此标准曲线,根据测出的未知样品的a595值,即可查出未知样品的蛋白质含量。 0.5mg牛血清蛋白/ml溶液的a595约为0.50。 2.微量法 当样品中蛋白质浓度较稀时(10-100mg/ml
样品的测定,只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好。因而完全不用像lowry法那样费时和严格地控制时间。 3. 干扰物质少。如干扰lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、edta等均不干扰此测定法。 此法的缺点是: 1. 由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作标准曲线时通常
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