外泌体qPCR验证服务

产品简介：
实时荧光定量PCR技术（Real-time quantitative PCR），简称qPCR，是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过内参/标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。通过qPCR可对微量外泌体目的RNA（miRNA、mRNA、lncRNA）进行验证，以验证其在不同样本中的表达差异。


服务优势：

• 外泌体纯度高——Exosupur^®试剂盒可获得高纯度外泌体，从源头保证PCR验证的准确性；
• 优化实验条件——研发比较不同提取试剂盒，选择提取效率最高的试剂盒；研发比较不同反转录试剂盒反转录效率，选择反转效率最高，最稳定的试剂盒；
• 智能辅助引物设计——根据外泌体RNA片段化的特点、计算目的基因不同片段验证潜能性，选择最具代表性的RNA区域进行引物设计，提高验证效率；
• 项目经验丰富——外泌体qPCR反应200000+，涉及40+样本类型，在外泌体RNA的qPCR验证上有丰富的经验，qPCR验证结果在外泌体顶刊上发表。

样本要求：
生物流体样本：按照不同的样本要求进行样本前处理；推荐每个样本重复3次。
需客户提供待测RNA名称和序列；额外提供2例同类型样本，用于引物、探针优化及阳性对照。

定量技术：
TaqMan探针法。
TaqMan探针法的特异性和灵敏度更高，更适合外泌体RNA的定量检测。

定量方法：
相对定量
对待测样本中的目的RNA进行检测，并确定目的RNA相对于内参基因、目的RNA在实验组中相对于对照组的相对表达情况，一般采用2^-∆∆Ct法进行计算。

绝对定量
对待测样本中的目的RNA进行检测并确定样本中基因的拷贝数。需制备标准品并建立标准曲线（由客户提供标准品），通过对比标准曲线得到目的RNA的准确拷贝数。

引物设计注意事项：
大部分外泌体RNA是断裂的，因此我们获取的是片段化的信息；不同片段表达趋势都不相同，因此选择合适的代表性片段很重要。恩泽基于项目经验，编写脚本辅助引物设计片段的选择，提高外泌体RNA验证的准确性，提高验证率。

探针法和染料法的区别：
探针法荧光定量PCR由于探针序列可以特异识别靶分子而更特异。而SYBR Green I染料法当有引物二聚体或者非特异性扩增时，该染料也可以和这些非特异性扩增产物结合，发出荧光，从而干扰对特异性产物的准确定量。因此相比染料法，探针法更特异。同时，若体系中靶分子很少的时候，由于探针法特异性结合靶分子的能力更强，因此可以准确检出；但染料法由于非特异结合导致本底信号高，很可能检测不到靶分子或者检测的靶分子信号会被背景信号掩盖。

项目周期： 
 

项目	周期（样本数量≤50）	周期（样本数量：50-100）
外泌体qPCR验证服务	25 工作日	35 工作日

交付结果：
引物和探针序列；原始Ct数据；分析结果；试验报告。