外泌体提取服务

外泌体抽提

Dr.Cell实验室采用超速离心方法从细胞培养上清液、血清、血浆、尿液、脑脊液以及其他体液（腹水、羊水、乳液以及唾液等）中的提取外泌体，获取的高纯度外泌体颗粒，可进行后续的NTA、TEM、WB等分析。

样本准备 

1. 细胞上清 Cell culture supernatant

   细胞培养基必须使用去除 exosome的血清（如去外泌体胎牛血清,Exosome depleted Fetal Bovine Serum, VivaCell P/N: C38010050 ）或者无血清培养基，以降低背景值的干扰（牛血清中含有大量牛源外泌体）。
   1)细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间，细胞增长至约70%；
   2)对于贴壁细胞，去除原有培养基，用PBS洗涤，更换新的含去外泌体血清的培养基或者无血清培养基；对于悬浮细胞，300×g，4℃，10分钟收集细胞，用PBS洗涤，使用不含外泌体的培养基或者无血清培养基悬浮细胞并继续培养；
   3)细胞继续培养24-48小时，根据细胞的生长速度确定收取上清时间；
   4)收集细胞上清，300×g，4℃，离心10分钟；小心吸取上清，注意避免吸入细胞或者细胞碎片；
   5)上清0.22µm过滤，去除细胞碎片、凋亡小体和微囊泡；
   6)将上清样本冻存于-80℃。
   建议送样量：20 mL以上

2. 血浆 Plasma

   1)取全血至EDTA抗凝管中，轻柔混匀；
   2)4°C条件下，2500×g，离心15 min，取上清；
   3)再次2500×g，离心15 min，取上清即为血浆；
   4)血浆于-80°C保存。
   建议送样量：2 mL以上

3. 血清 Serum

   1)将4ml全血置于普通采血管中（注意收集血清样本不要加入抗凝剂）37℃凝固20-30 min；
   2)2000×g离心10 min，取上清，淡黄色透明液体即为血清；
   3)将血清置于-80°C保存。
   建议送样量：2mL以上

4. 尿液 Urine

   1)无菌容器收集清晨第一次尿液50mL；

   2)加入蛋白酶抑制剂混合物（1.67 mL of100mM NaN3, 2.5ml PMSF (2 mg/ml in isopropyl alcohol), 50 µl Leupeptin (1 mg/ml in ddH2O)）；

   3)立即处理或置于-80°C保存。

   建议送样量：20ml以上

5. 脑脊液 Cerebrospinal fluid

   1)收集脑脊液，放置冰上静置30 min；

   2)4 ℃ ，2000×g，离心10分钟，去除细胞或细胞碎；

   3)取上清，立即处理或置于-80°C保存。

   建议送样量：10 mL以上

样本寄送 

1. 一般不上门取样，请用快递寄送。生物样本应避免反复冻融，当天或次日可到可用冰袋，否则请用干冰，可混冰袋，干冰若挥发完可继续保持低温。

   *下单需要填写物流信息，请在寄出样本后保留物流单号并下单。

2. 为保证样本接收无误，可随样本附上您的联’系方式和样本数量，谢谢！

3. 收样信息详`询

检测周期

实验室收到样本后10-15个工作日内完成检测，提供外泌体抽提步骤和报告。

报告交付 

全款到账后交付所有检测数据；或个人先行交付押金（全部检测费用的100%），则交付所有检测数据，我司对公账户收到全款后将押金原路退回；

  *支付宝交付押金时请备注“单位+押金”

特别注意事项

1. 下单后可自行查看检测进度（个人中心→我的订单）；

2. 本司默认仅寄送发票（检测服务类发票，含6%税费）供委托检测方报销使用，如需其他材料请提前说明，在下单页面的备注栏中填写。否则，涉及二次寄送则一律到付，特此告知。

保密承诺

我公司郑重承诺：
客户提供产品的检测信息与数据，履行保密义务，未经客户许可，不得擅自公开发表或使用，不得泄露给第三方。检测产品仅做数据统计用。