外泌体表征-粒径分布和颗粒浓度检测

一、服务项目简介

外泌体鉴定即外泌体表征，主要是为了证明分离获得的细胞外囊泡是外泌体，具有外泌体的结构特征，粒径特征和蛋白marker。MISEV2018提示了外泌体研究最基本的实验，其中外泌体的表征主要分为两部分：总体水平表征外泌体标志蛋白和单囊泡水平表征外泌体拓扑结构和粒径；目前文章发表最常用的外泌体表征3项包括WB表征外泌体标志蛋白，电镜表征外泌体形态特征和纳米流式表征外泌体粒径特征。

粒径分析：应用纳米流式（NanoFCM）或纳米颗粒跟踪分析（NTA）或RPS（电阻脉冲传感）方法，对粒径分布和颗粒浓度进行分析

二、粒径分析原理
1）纳米流式检测技术（NanoFCM）是在细胞流式的基础上开发的纳米级流式技术，无需标记即可在单囊泡水平实现外泌体的直接检测，可以检测低至30 nm 的外泌体的散射光信号；荧光通道可以实现单个藻红蛋白分子的检测，并与背景完全区分开。通过数据分析可直接获得外泌体的粒径和浓度信息，同时可以检测单个外泌体颗粒的内源性或外源标记的荧光信号。
2）纳米颗粒跟踪分析检测（Nanoparticle Tracking Analysis,简称NTA）使用仪器为Zetaview（德国Particle Metrix），检测提取颗粒在不同粒径大小的浓度分布，支持自主画图。

3）电阻脉冲传感（RPS）是一种非光学技术，它利用库尔特原理来确定颗粒的浓度和直径，RPS 测量结果与透射电子显微镜（TEM）数据具有很高的一致性，检测下限直径约为 50 nm。仪器为纳米库尔特粒度仪。

三、粒径分析结果示例图

1)纳米流式检测分析结果示例图

2）NTA检测分析结果示例图

3）RPS检测分析结果示例图

四、检测平台

纳米流式：福流NanoFCM，适用于<200nm以下的囊泡颗粒浓度和粒径分布检测。

NTA：zetaview particle metrix，适用于<1000nm以下的囊泡颗粒浓度和粒径分布检测。

五、送样要求

提供外泌体悬液即可，我公司同时提供外泌体分离服务，也可送原始样本先分离外泌体。

样本要求：

1.建议浓度≥1E+9，若浓度低于1E+9，可检测但准确度只能达到量级水平；
2.送样体积不少于30μl；RPS建议≥200μl；
3.为防止堵塞仪器管路，外泌体分离过程中需用0.22μm滤器过滤。

样本寄送

1. 做电镜和NTA的外泌体样本请4℃保存，冰袋运输寄送。做Western blot，请将外泌体干冰运输；

2. 寄送样本时，请务必随样本附带一份纸质版订单，以免因无法确认而造成样本丢失或影响样本核对入库；

3. 生物样本应避免反复冻融。请在寄出样本后将物流信息填入订单。

 

六、鉴定周期

10个样本以内：

NanoFCM检测粒径分布和颗粒浓度：5个工作日；

Zetaview NTA粒径和颗粒浓度检测：8个工作日。

RPS粒径和颗粒浓度检测：78个工作日。

七、交付内容及方式

1. 外泌体粒径分布和颗粒浓度检测结果；

2. 全款到账后交付所有检测原始结果；

服务说明
针对外泌体样本只提供鉴定服务的项目，由于样本来源不同且外泌体分离实验的特殊性，乙方在保证优质服务的前提下客观呈现实验结果。