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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20°C
- 保质期:
两年
- 供应商:
江苏天净沙
- 规格:
2ug
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文献和实验的方法进行质粒DNA的提取,所用具体试剂见表1: ①挑取单菌落,接种于4. 0mlLB (含氨苄青霉素)液体培养基中, 37℃、250 rpm振荡培养过夜(约12~14h) 。②取1. 5ml培养物加入Eppendorf管中,室温12000g离心1min,弃上清。③将细菌沉淀重悬于100μl预冷的溶液Ⅰ中,剧烈振荡,使菌体分散混匀。④加200μl新鲜配制的溶液Ⅱ,颠倒数次混匀(不要剧烈振荡) ,并将离心管放置于冰上2min。⑤加入150μl预冷的溶液Ⅲ,将管温和颠倒数次混匀冰上放置3min。⑥加入
QIAGEN Plasmid plus Kit——超快纯化多至10 mg转染级别纯质粒
♦利用真空方式超快速进行质粒纯化,碱裂解步骤后,利用QIAfilter无须离心即可澄清裂解液,然后离心柱安置于真空底座(例如:QIAvac 24 Plus 见图1)上进行DNA的洗涤和洗脱。Midi and Maxi kit 20 分钟内可纯化24 个样本Mega和Giga Kit可分别在40,50分钟内处理12个样本。 ♦QIAGEN Plasmid plus Midi/Maxi Kit 提供优化的高产量protocol 并采取高洗脱体积,确保纯化得到高产量质粒DNA
一、目的:了解质粒抽提常用的方法和原理;掌握试剂盒制备质粒DNA 的法。二、原理:(一)质粒DNA 制备三个步骤:1、细菌培养与质粒扩增2、菌体收集和溶菌3、质粒DNA分离(二)方法介绍:1、碱变性抽提法(SDS法):主要是利用染色体DNA和质粒DNA碱性环境中变性和复性的差异来分离出质粒DNA。染色体DNA 分子量比较大,在碱性环境中(高pH)变性,双链解拆开,抽提时由于机械剪切力的作用,环状断裂成线状,当pH 恢复中性时,无法恢复成环状,就呈网状与蛋白质一起通过离心沉淀下来。质粒DNA
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