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两年
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江苏天净沙
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2ug
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文献和实验一、 目的 学习几种小规模制备质粒DNA的技术,比较这几种方法所制备的几种质粒DNA的效果。 二、 原理 在介绍的载体中,有PUC系列、PBS与PBR322均属拷贝数较高的质粒,只要用小规模制备一次的质粒DNA,就有足够的量用于常规的基因工程操作。小规模制备质粒DNA的特点是可以一次制备多种质粒DNA(12—24个不同的质粒DNA样品),速度快,时间省,步骤简化,DNA纯度好,可以用于酶切、连接,甚至多纯化
耐药质粒 DNA转化实验 本实验学习将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆,即转化子。 【原理】 受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca++ 处理,可改变细胞膜的通透性,利于受体菌对DNA的摄取,这种经Ca++ 处理的细菌称感受态菌。pBR322 质粒带有氨基苄青霉素(Ap)和四环素(Tc)基因,如将pBR322质粒转入到对上述抗生素敏感的Ecoli RRI菌体内,则可使该细菌获得Apr和Tcr,表现出对Ap和Tc的抗药
mM CaCl2 3.氨苄青霉素琼脂平板(50ug/ml) 实验设备 1.灭菌小试管 2. 刻度吸管 3. 微量加样器 4. 离心机 5. L形玻璃棒 实验材料 1.菌株 E.coli RRI 2.pBR322 质粒DNA, 3.感受态菌75mmol CaCl2 实验步骤 1. 感受
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