两性电解质(pH6-9)
产品储存:2-8℃、避光
产品名称:Ampholyte
产品内容:
产品说明:
两性电解质就是既能当酸又能当碱用的电解质。通常为两性元素的氧化物的水合物、氨基酸等。两性电解质在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子,向电场的正极泳动;在小于其等电点的 pH环境中解离成带正电荷的阳离子,向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的 pH 环境中,即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。两性电解质适用于植物蛋白的等电聚焦。
凝胶溶解:
1. 30%酰胺(Acr-Bis):30 g 酰胺+1.5 g 烯酰胺加水至 100 mL,定溶后过滤。
2. 甘-T:23mL 丙三醇+0.5 mL TRITON 加水至 100 mL。
3. 1%四甲基(TEMED):1 mL TEMED 加水至 100 mL。
4. 1%酸铵(AP):1 g 酸铵加水至 100 mL。
5. 顺丁烯二酸缓冲液:3.08 g 化钠+5.8 g 顺丁烯二酸加水至 100 mL。
6. 1%α-萘脂:1 g 醋酸-α-萘脂加 100 mL 正丁醇。
7. 7%冰乙酸:70 mL 冰乙酸加水至 1000 mL。
电泳操作:
(1)样品处理
浸泡:先将所需鉴定的种子浸泡一段时间,以备取胚使用。
取胚:用镊子把种子的胚取出,放入 0.5 或 1.5mL 离心管内。
研磨:在离心管内加入 0.1 mL 蔗糖提取液,然后将胚研成匀浆,放入冰箱保存。
(2)凝胶制备
1. 配制凝胶前,应把玻璃板准备好。即将两块干净的玻璃板叠放在一起,之间夹上所需凝胶厚度的胶条进行四边密封,一端留有小口用来凝胶。然后用文具夹奖玻璃板四周固定好。注意夹子作在胶条正中,以防漏胶。
2. 配制凝胶时,先将所需贮备液自冰箱中取出放置室温。
3. 将各种贮备液体按一定比例混合(见表 1)最后加入 0.5 mL 1%过铵,搅拌均匀。然后用注射器吸净混合液,排除气泡,缓缓注入玻璃板的夹隙内。
4. 将注入混合液的玻璃板静置放好,隔夜使用。
电泳:
1. 制胶板:将胶板取出,揭去上层的玻璃板和胶条,然后用蒸馏水轻轻冲洗一下胶面。
2. 点样:将浸入电极的滤纸条取出,压半较胶放在胶板上,然后放入电泳槽内,注意正负极相吻合。将电泳槽平置于冰箱内(电泳时的温度一般在 0~4℃冰箱中进行),接通电源,把电泳仪调至电压 50 V,电泳以每板胶不超过 17 mA 为准,然后开始电泳。进样时间一般在 1.5~2 小时。
3. 揭样纸:待电流降至每板胶 3 mA 以下时,切断电源取出胶板,揭去样纸 200-320V 继续电泳。
4. 加压:当电泳降至每板胶 3 mA 以下时,升高电压至 500 V,继续电泳 1.5 小时左右。
5. 电泳降至每板胶 3 mA 以下时,切断电源结束电泳。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!