- ￥488 - 878
- 博尔森/BIOESN
- BES21370KB
- 中国
- 2025年07月09日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
CTB buffer
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
4℃
- 规格：
100mL /500mL
| 规格： | 100mL | 产品价格： | ￥488.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500mL | 产品价格： | ￥878.0 |
CTB缓冲液（除菌）—猪链球菌感受态制备试剂
储存条件： 4℃保存，有效期 1 年。
产品内容：
操作步骤（以 SC-19 为例，仅供参考）：
（一）感受态细胞的制备：
1. 挑猪链球菌 2 型菌 SC-19 单菌落于 10mL 加 5%牛血清的 TSB 中，37℃ 摇床培养过夜。
2. 以 1:100 的比例转接于 TSB 培养基中，37℃ 摇菌 2-3h，使菌液处于对数生长期（OD600 约为 0.3-0.5）。
3. 6000 rmp/min 离心 1min。弃上清。以 100mL 菌液为例。
4. 用 10mL 的 CTB 重悬菌液，轻柔混匀，4℃ 6000rmp/min 离心 1min ，弃上清，用 10mL 的 CTB 重悬，冰浴 30 min。
5. 4℃ 6000rmp/min 离心 1min ，弃上清，用 10mL 的 EB(EBS) buffer 洗两次。
6. 离心弃上清，用 500 uL 的 EB 甘油缓冲液(EB 缓冲液加 15%的甘油)重悬菌体沉淀，按 100uL 分装。
（二）转化：
1. 在 100uL 感受态细胞中，加入质粒混匀，加入电转杯中，电击。
2. 电击后，加入 500uL 的 在 37℃ 预热的含胎牛血清的 TSB 中，37℃摇床孵育 2h 。
3. 将菌液涂布于相应的抗性筛选的 TSA 平板，28℃培养 24-32h，得到含有穿梭质粒的链球菌单菌落。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验，不能得到足够的菌量来抽提质粒，摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型，导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多：容易导致裂解不充分，且容易超过硅胶膜柱的承载上限，最终使得质粒提取效率降低，建议参考提取试剂盒建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当：比如在加入缓冲液重悬菌体时，菌体没有充分分散悬浮，导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解，可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂（QIAGEN 质粒提取试剂盒中均有配备 LyseBlue 指示剂），均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用
下空气蒸发残存的乙醇。3. Oligo(dT) 纤维素层析法提取 mRNA【实验原理】真核细胞的 3』端有 poly(A) 尾，因此可用 Oligo(dT) 纤维素结合 mRNA，从而将 mRNA 从总 RNA 中分离出来。Oligo(dT) 纤维素就是将 Oligo(dT)15～18 结合到纤维素上，制备成能特异性结合带 Poly(A) 尾 RNA 的纤维素。【实验试剂与器材】（1）Oligo(dT) 纤维素（2）层析柱装置（3）1×上样缓冲液：20 mM Tris.Cl (pH7.6)，0.5M
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