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CTB缓冲液(除菌)—猪链球菌
企业认证
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50
CTB buffer
1年
上海博尔森生物科技有限公司
4℃
100mL /500mL
CTB缓冲液(除菌)—猪链球菌感受态制备试剂
储存条件: 4℃保存,有效期 1 年。
产品内容:
操作步骤(以 SC-19 为例,仅供参考):
(一)感受态细胞的制备:
1. 挑猪链球菌 2 型菌 SC-19 单菌落于 10mL 加 5%牛血清的 TSB 中,37℃ 摇床培养过夜。
2. 以 1:100 的比例转接于 TSB 培养基中,37℃ 摇菌 2-3h,使菌液处于对数生长期(OD600 约为 0.3-0.5)。
3. 6000 rmp/min 离心 1min。弃上清。以 100mL 菌液为例。
4. 用 10mL 的 CTB 重悬菌液,轻柔混匀,4℃ 6000rmp/min 离心 1min ,弃上清,用 10mL 的 CTB 重悬,冰浴 30 min。
5. 4℃ 6000rmp/min 离心 1min ,弃上清,用 10mL 的 EB(EBS) buffer 洗两次。
6. 离心弃上清,用 500 uL 的 EB 甘油缓冲液(EB 缓冲液加 15%的甘油)重悬菌体沉淀,按 100uL 分装。
(二)转化:
1. 在 100uL 感受态细胞中,加入质粒混匀,加入电转杯中,电击。
2. 电击后,加入 500uL 的 在 37℃ 预热的含胎牛血清的 TSB 中,37℃摇床孵育 2h 。
3. 将菌液涂布于相应的抗性筛选的 TSA 平板,28℃培养 24-32h,得到含有穿梭质粒的链球菌单菌落。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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